...（V/V）甲酰胺溶于4×SSC预热37℃15～45min 。 （11）杂交：将载片上过量的甲酰胺液倾去，加20μl杂交混合液（含放射性同位素标记的探针量为5×10 3 ～ 10 6 cpm/每张载片）。覆以硅化的盖玻片，置于盛有少量5×SSC的硬塑料盒内以保持湿度，42℃孵育12～18h。为使载片不致于浸泡于SSC溶液内，通常以二根玻管（或棒）扎成担架状，载...
（一）光敏生物素标记cRNA探针的应用 以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针，使其最终浓度为0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦卤素灯下，距离光源20cm处照射30min。用仲丁醇抽提游离生物素，再用丁醇沉淀回收光敏生物素cRNA探针，将其溶于适量的灭菌双蒸水，用紫外分光...
三硝基甲苯中毒 是接触过量 三硝基甲苯 （ TNT ）引起的主要损害 晶状体 、肝和 血液系统 的疾病。 急性中毒 出现 高铁血红蛋白血症 、 紫绀 及 中枢神经系统 抑制。慢性 中毒 除 神经衰弱 综合症 外，主要表现为 中毒性白内障 、 中毒性肝炎 及 低色素性贫血 及 再生障碍性贫血 ，有“三硝基甲苯面容”，即面部苍白， 口唇 及耳壳青紫。除脱离接触外...
（一） DNA 探针 DNA探针是最常用的 核酸 探针，指长度在几百 碱基对 以上的双链DNA或 单链DNA 探针。现已获的DNA探针种类很多，有 细菌 、 病毒 、 原虫 、 真菌 、动物和人类 细胞 DNA探针，这类探针多为某一 基因 的全部或部分序列，或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的，如细菌的 毒力 因子 基因探针 和人类ALU探针，这些DN...
基因探针根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探针两大类，根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针，RNA探针，cDNA探针，cRNA探针及寡核苷酸探针等几类，DNA探针还有单链和双链之分。下面分别介绍这几种探针。
探针 是一小段 单链 DNA或者RNA片段（大约是20到500bp）， 用于检测与其互补的 核酸 序列。双链DNA加热变性成为单链，随后用 放射性同位素 （通常用磷-32）、萤光染料或者酶（如 辣根 过氧化物酶）标记成为探针。磷-32通常被掺入组成DNA的四种 核苷酸 之一的 磷酸基 团中，而 荧光染料 和酶与核酸序列以 共价键 相连。 当将探针与样品杂交时...
前述三种探针均是可克隆的，一般情况下，只要有克隆的探针，就不用寡核苷酸探针。在DNA序列未知而必须首先进行克隆以便绘制酶谱和测序时，也常应用克隆。克隆探针一般较寡核苷酸探针特异性强，复杂度也高，从统计学角度而言，较长的序列随机碰撞互补序列的机会较短序列少，克隆探针的另一优点是，可获得较强的杂交信号，因为克隆探针较寡核苷酸探针掺入的可检测标记基因更多。但是，较...
核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备： （1）直接分离基因核酸：即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。 （2）化学合成基因核酸：即以单核苷酸为原料，以固相磷酸三酯法合成某一结构完全清楚，分子量较小的寡核苷核。 （3）酶促合成核酸：在真核细胞中获得特异的结构基因。常用方法是以mRNA为模板，利用逆转录酶合成单链cDNA，再以...
RNA探针是一类很有前途的核酸探针，由于RNA是单链分子，所以它与靶序列的杂交反应效率极高。早期采用的RNA探针是细胞mRNA探针和病毒RNA探针，这些RNA是在细胞基因转录或病毒复制过程中得到标记的，标记效率往往不高，且受到多种因素的制约。这类RNA探针主要用于研究目的，而不是用于检测。例如，在筛选逆转录病毒 人类 免疫缺陷 病毒（HIV）的基因组DNA克...
DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和 人类 细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的，如细菌的毒力因子基因探针和人类Alu探针。这些DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。以细菌为例，目前分...
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