...加端PCR(add-PCR)是使扩增产物的5’-末端加一段DNA顺序的PCR。设计加端PCR的引物时,除与模板配对的那一部分外再加上若干碱基,这样使扩增产物的末端加上额外一段DNA,如加上一个限制酶的识别顺序或特定功能的DNA片段。...
...Poly-merase chain reaction, PCR)扩增技术:利用这种先进技术能简便快速制备大量特异性目的核酸片段。PCR技术的基本原理是利用DNA聚合酶依赖于DNA模板的特征,在体外用一对和欲扩增DNA片段的两侧序列互补的引物...
...直接分析法,PCR产物RFLP分析法,等位基因特异性寡核苷酸(ASO)杂交法等等,其中最多用且简单的方法有PCR产物直接分析法和PCR产物RFLP分析法。PCR产物直接分析法,是采用合适的引物,通过多次扩增,获得靶基因序列扩增片段,直接...
...保守序列的引物,遵循PCR引物设计的原则,保证每条引物及4条引物间无互补结构,引物间Tm值相近,两者扩增后分别在400和110 bp出现阳性扩增带,电泳后较易鉴别。引物序列如下:VH:5′-ACACGGCCGTGTATATCTGT-3′;JH:5...
...Minifold I点膜,80℃真空处理膜2h,用496bp探针65℃杂交过夜。探针为引物47-3和47-4的PCR产物,用随机引物法标记.2.扩增39KDa碱性膜蛋白基因:25μ1反应体系含:1×RT缓冲液,50mmol/lTris-HCl(pH...
...一对引物规定的模板序列范围内,一般循环30-40次,按理论计算,目的序列可扩增230-240倍,而实际上由于底物和引物的消耗,酶的失活等因素,产物量并不是始终以指数增加的,但通常实验获得目的序列106-108倍的扩增产物并不困难,因而PCR...
...一对18个碱基的寡核苷酸链为引物,特异引导扩增后的DNA产物为411个碱基对。其他学者都是以Clayton报告的Hp尿素酶基因的部分核苷酸序列为依据而设计PCR的引物。Courcoux等选择尿一纱酶C基因中的一段294bp作PCR反应。2.2...
...一对18个碱基的寡核苷酸链为引物,特异引导扩增后的DNA产物为411个碱基对。其他学者都是以Clayton报告的Hp尿素酶基因的部分核苷酸序列为依据而设计PCR的引物。Courcoux等选择尿一纱酶C基因中的一段294bp作PCR反应。2.2...
...;改变两引物浓度,使其相差100倍,结果得到大量单链产物,称为不对称PCR,其单链产物可用于序列分析;在一个反应中加入多对引物同时检测多个部位的多重PCR等等。三、扩增片段长度多态性小卫星DNA和微卫星DNA的长度多态性可以通过PCR扩增后...
...,不宜过短或过长)作为引物,在PCR仪中经过30—50个温度循环扩增其核酸片段,使其呈几何级数长,然后取其产生或其酶切片段在琼脂糖上跑电泳,即可判断所得产物是否即企望的基因产物。目前亦已可用这一反应来测知标本中有无Hp的存在,甚至还可进一步...
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