...Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交(见Cox et al 1984),核酸探针为单链的RNA分子,产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆(图20-2)。由于它是单链的,不像双链的DNA探针,在溶液中不会再退火(...
...复性和杂交。粗细线分别代表不同DNA。A是杂化双链Ⅱ.突变体的鉴别。B代表天然DNA;C是B的缺失突变体;虚线框内是已缺失的部分;D是显示从天然DNA链鼓出小泡 Ⅲ.粗线代表探针,粗线上的X表示放射性标记在核酸杂交的基础上发展起来的一种用于...
...底物掺入带有缺口的DNA或RNA,得到生物素标记的核酸探针。这种标记方法称为缺口平移法。用标记在DNA上的生物素与链霉亲合素-酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)标记物进行检测。缺口平移法标记生物素DNA探针:在硅化Eppendorf管(放入冰浴中)...
...结构完全清楚,分子量较小的寡核苷核。(3)酶促合成核酸:在真核细胞中获得特异的结构基因。常用方法是以mRNA为模板,利用逆转录酶合成单链cDNA,再以大肠杆菌DNA聚合酶I合成双链的结构基因。(4)RNA探针。二、目的核酸的扩增在获得特异的...
...1988年德国Boehringer Manheims公司推出了一种地高辛标记DNA检测试剂盒。先将地高辛甙元通过一手臂联接至dUTP上,用随机引物法标记DNA制成探针。平均每20~25个核苷酸中标记一个地高辛甙元,然后用抗地高辛抗体的...
...translation),利用此反应可在体外对DNA片段进行放射性磷(α-32PdNTP)的标记制成探针(probe),进行核酸的分子杂交实验,是现代分子生物学的一项重要技术(图16-11)。 图16-11 缺刻平移标记DNA探针许多实验证实DNA ...
...顺序不同所决定。这种碱基顺序的差别造成限制性内切酶识位置及酶切位点数目的不同,从而产生数量和长度不一的DNA酶切片段。用特异性探针对整个基因组DNA酶切片段进行杂交,即可分析限制性长度片段多态性(restriction fragment ...
...光敏生物素的醋酸盐很易溶于水,与核酸形成的共价结合很稳定。此法有以下优点:方法简便易行,快速省时,不需昂贵的酶和dUTP等;只需光照,探针稳定,-20℃可保存12个月以上。适用于DNA和RNA,抗体和酶等的标记。在原位分子杂交,斑点杂交和...
...RNA探针比cDNA探针的敏感性提高10倍以上,在许多优点。它们是单链,不需变性,也没有互补链的干扰,与靶基因杂交比DNA探针更稳定。Bio-11-dUTP可通过Sp6、T3和T7RNA聚合酶掺入到RNA转录子中。标记方法:其下列反应体积...
...PCR-ASO技术,即先将含有突变点的基因有关片段进行体外扩增,然后再与ASO探针作点杂交,这样大大简化了方法,节约了时间,而且只要极少量的基因组DNA就可进行。...
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