...:①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。④容易从宿主细胞中...
...从DNA或RNA的三磷酸脱氧核糖核苷酸或三磷酸核糖核苷酸上除5’-磷酸根残基。一般的用途是用这种酶处理DNA或RNA后,在5’端上标记32P。在经限制性内切酶酶切DNA片段后,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)处理...
...cDNA探针很繁琐,所获得cDNA的长度和纯度也不稳定。所以寻求新的探针来源是使分子杂交技术进一步推广的基础。70年代末期到80年代早期,分子生物学技术有了突破性进展,限制性内切酶的发展和应用使分子克隆成为可能。各种载体系统的诞生,尤其是质粒和...
...尚可采用一种称为寡核苷酸限制(oligonucleotide restriction)的技术。该技术只有在突变点位于某一限制性内切酶识别位点时才有效。例如,镰刀状红细胞贫血是因β珠蛋白基因的第6个寡码子由GAG变成GTG,从而导致所编码氨基酸...
...限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease),又简称限制酶或内切酶。它们是基因工程和基因诊断重要的一类工具酶。它们的发现和应用为从基因组中分离目的基因提供了必要的手段.限制酶能特异地识别和切割特异的...
...沉淀,干燥10min。13.用50μl含无DNA酶的胰RNA酶(20μl/ml)的TE重新溶解核酸,振荡,贮存于-20℃。14.用适当限制性内切酶分析所得DNA。...
...限制性内切酶作用部位(切点)也不同,这种酶切点只有4~6个核苷酸长度。因此来源于不同HLA单倍型的DNA可被一种内切酶切成不同长度的片段。在实际工作中,从细胞中提取基因组DNA(genomic DNA)的多态性比实际HLA-Ⅱ类抗原的多态性...
...最早的研究方法是用限制性核酸内切酶直接消化培养,鉴定后的Hp染色体DNA,经过琼脂糖电脉按大小分离所得的片段,来比较各株细菌的基因组DNA酶切图型。Langenberg等报道了用HindⅢ限制性内切酶分析Hp的全基因差异。Wetherall...
...主要突变进行筛查。四、RFLP连锁分析法限制性片段长度多态性(restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP)是采用不同的限制性核酸内切酶酶切和多种cDNA片段探针,根据DNA多态性片段的出现,确定...
...主要突变进行筛查。四、RFLP连锁分析法限制性片段长度多态性(restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP)是采用不同的限制性核酸内切酶酶切和多种cDNA片段探针,根据DNA多态性片段的出现,确定...
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