...1.产生灭活酶 灭活酶有两种,一是水解酶,如β-内酰胺酶可水解青霉素或头孢菌素。该酶可由染色体或质粒介导,某些酶的产生为体质性(组构酶);某些则可经诱导产生(诱导酶)。二是钝化酶又称合成酶,可催化某些基团结合到抗生素的OH基或NH2基上,...
...处理细胞,经处理后的细胞就容易接受外界DNA,称为感受态细胞,再与外源DNA接触,就能提高转化效率。例如大肠杆菌经冰冷CaCl2的处理,就成为感受态细菌,当加入重组质粒并突然由4℃转入42℃作短时间处理,质粒DNA就能进入细菌;用高电压脉冲...
...这是在上述筛选后的进一步分析。目的序列插入载体会使载体DNA限制性酶图谱(restriction map)发生变化,例如一个长600bp的目的序列利用它两端的EooR I和SalI切后的粘末端连接插入pUC19的多克隆点,则重组质粒就增大...
...influenzae biogroup aegyptius,HIBA)。从典型巴西紫热患者血或脑脊液中获得的HIBA(称为BPF株),与仅引起结膜炎的HIBA(对照株)比较,发现BPF株均含有分子量为0.024的质粒,对照株多含有分子量为0.002的质粒或无...
...载体可插入长5-20kb的外来DNA,这比质粒载体能插入的DNA长得多;而且包装的λ噬菌体感染大肠杆菌要比质粒转化细菌的效率高得多,所以λ噬菌体载体常用于构建cDNA文库或基因组文库。但λ噬菌体载体的克隆操作要比质粒载体复杂。如果将左右臂和...
...应用探针DNA上的一个片段作为DNA引物,以环化探针DNA的重组质粒DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下,通过变性,退火和延伸过程,使探针DNA得到标记。反应在0.5ml离心管内进行,总体积为25μl,内含50mmol/l Tris—...
...细菌的耐药性又称抗药性,一般是指细菌与药物多次接触后,对药物的敏感性下降甚至消失,致使药物对耐药菌的疗效降低或无效。一、耐药性产生机制1.产生灭活酶 灭活酶有两种,一是水解酶,如β-内酰胺酶可水解青霉素或头孢菌素。该酶可由染色体或质粒介导...
...动物实验中,王延军博士的这项研究利用基因转导技术,将基因工程构建的基因疫苗免疫小鼠,证实了B7-2真核表达质粒为佐剂与目的疫苗共免疫,两者结合可有效增强其特异性免疫应答。这种共免疫策略为增强抗HBV特异性细胞免疫应答的抗HBV治疗新途径提供了...
...0.6。离心弃去上清液,用20ml,50mmol/L,CaCl2悬浮菌体。冰浴20分钟,低温离心。弃上清液,用2.5ml冰50mmol/l CaCl2悬浮。4℃可保存48小时,用于转化,称competent cells。⒉质粒(如经基因重组...
...质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖,不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多,因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。使载体及其携带的外来序列能方便地在...
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