...建立基因库的目的是为了便于目的基因的保存、扩增和纯化。基因库是利用工具酶,通过基因重组技术和转化、筛选而建立,也是基因克隆的过程。实际上是利用低等生物如细菌、病毒、噬菌体等生长快,繁殖力强的特点,而作为一种核酸扩增筛选的载体,把人类等高等...
...的制备 二、目的核酸的扩增 第三节 放射性同位素标记核酸探针 一、缺口平移法 二、末端标记法 三、应用特异单引物法标记DNA探针 四、双引物法标记DNA探针法 五、聚合酶链反应(PCR)标记高活性DNA探针 第四节 非放射性标记的核酸探针 ...
...成比例的。该法的缺点是检测的敏感度低(1ng的靶核酸),仅适用于检测扩增的靶序列,如rRNA或PCR扩增产物。3、液相夹心杂交(1)亲和杂交 在靶核酸存在下,两个探针与靶杂交,形成夹心结构。杂交完成后,杂交物可移到新的管或凹孔中,在其中杂交物...
...分子生物学是在生物化学基础上发展起来的,以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科,在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。其中基因工程(基因技术,基因重组)是目前分子生物学研究热点,这些技术可以改造或扩增基因和基因产物...
...(一)载体载体(Vector)是把外源DNA(目的基因)导入宿主细胞,使之传代、扩增、表达的工具。载体有质粒(plasmid)、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒(粘粒)、病毒等。载体具有能自我复制;有可选择的,便于筛选、鉴定的遗传标记...
...分子探针 第一节 概述 第二节 核酸(基因)探针目的核酸的制备技术 一、特异性目的核酸(或基因)的制备 二、目的核酸的扩增 第三节 放射性同位素标记核酸探针 一、缺口平移法 二、末端标记法 三、应用特异单引物法标记DNA探针 四、双引物法...
...,苯酚提取主要使蛋白质变性沉淀于有机相,而核酸保留在水相,达到分离核酸的目的。实验上生物标本中含量最多的就是蛋白质。为了除去分离过程中残留的有机溶剂,常用的方法是加冷乙醇和盐沉淀核酸,通过离心回收核酸,然后用70%-80%乙醇洗涤沉淀,除去...
...要扩增模板DNA,首先要设计两条寡核苷酸引物,所谓引物,实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段,两引物间距离决定扩增片段的长度,两引物的5’端决定扩增产物的两个5’末端位置。由此可见,引物是决定PCR扩增片段长度、位置和结果...
...基因诊断的被检测基因或目的基因存在于样品中,先将样品中核酸提取出来,或在原位,或将样品点在硝酸纤维素滤膜上,再经蛋白酶处理,或酶切成较小的片段,经变性处理(热或碱变性)成单链。另一方面制备已知核酸序列标记的核酸分子探针,也经变性成单链。根据...
...小卫星DNA和微卫星DNA的长度多态性可以通过PCR扩增后电泳来检出,并用于致病基因的连锁分析,这种诊断方法称为扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,Amp-FLP)连锁分析法。...
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