...32P]dCTp 1.5×106Bq，dATp 、dGTP和dTTP各200μmol/L。标记反应包括3个步骤：（1）变性：反应管在95℃水浴5min，然后离心；（2）退火：37℃水浴2min；（3）延伸：加入DNA聚合酶i 1u，37℃水浴...
...作为包埋剂的（详见第七章 ）。（二）应用生物素标记DNA探针-PA-gold电镜杂交技术（Binder et al,1986）1．固定现认为应用4%多聚甲醛加0.1%戊二醛在磷酸缓冲液中（pH7.4），为较理想的固定剂，也有主张单纯用4%...
...近年来，基因分析和基因工程技术有了革命性的突破，这主要归功于聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）的发展和应用。应用PCR技术可以使特定的基因或DNA片段在短短的2－3小时内体外扩增数十万至百万倍。扩增...
...技术中最常用的工具酶酶主要用途限制性核酸内切酶识别DNA特定序列，切断DNA链DNA聚合酶Ⅰ或其大片段（Klenow）①缺口平移制作标记DNA探针②合成cDNA的第二链③填补双链DNA3’凹端④DNA序列分析耐热DNA聚合酶（Taq DNA...
...探针及细胞内靶DNA变性，解离成单链，迅置于冰上冷却。然后置于37℃～42℃杂交过夜。（2）RNA酶的溶液的冲洗不能减低背景，因此，在操作步骤中省略此步。（一）地高辛-碱性磷酸酶（Dig -AKP）标记DNA探针在石蜡包埋切片检测病毒DNA...
...变性，解离成单链，迅置于冰上冷却。然后置于37℃～42℃杂交过夜。（2）RNA酶的溶液的冲洗不能减低背景，因此，在操作步骤中省略此步。（一）地高辛-碱性磷酸酶（Dig -AKP）标记DNA探针在石蜡包埋切片检测病毒DNA中的应用1．组织前处理...
...Southern印迹杂交示意图当含有特定基因片段已原位转移到膜上后，即可与同位素标记了的探针进行杂交，并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行，袋内放置上述杂交滤膜，加入含有变性后探针的杂交溶液后，在一定温度下让单链探针DNA与固定于膜上的...
...标记的脱氧核苷三磷酸，经DNA聚合酶作用掺入DNA。Bio-dUTP代替dTTP,Bio-dATP代替dATP，Bio- dCTP代替dCTP。Bio –11-dUTP的11是指生物素基团与脱氧核苷酸之间连接臂的碳链长度。常用的酶促生物素标记...
...磺酸（TNBS）标记核酸探针 十、生物素化的RNA探针标记 十一、辣根过氧化物酶标记核酸探针法 十二、用聚合酶链反应标记高活性DNA探针 第五节 寡核苷酸探针的制备 参考文献 第二十章 原位杂交组织化学 第一节 原位杂交组织化学概述 一、...
...十二、用聚合酶链反应标记高活性DNA探针 第五节 寡核苷酸探针的制备 参考文献 第二十章 原位杂交组织化学 第一节 原位杂交组织化学概述 一、核酸分子杂交技术 二、原位杂交组织化学技术的由来及发展 三、原位杂交组织化学技术的基本方法 第二节...
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