...需要的37℃,因此,建议对盖片应用前在37℃进行预热。(3)用免疫细胞化学或组织化学方法显示荧光标记。自80年代以来,荧光素标记检测系统日益增加。包括:①生物素标记探针与荧光素标记的抗生物素(avidin)或抗生物素抗体。②氨乙酰基荧光(...
...探针比非放射性探针的灵敏度高。放射性探针的实际灵敏度不依赖于所采用的标记方法,如随机引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性。在检测单拷贝基因序列时,应选用标记效率高、显示灵敏的探针标记方法。在对灵敏要求不高时,可采用保存时间长的生物素...
...降解(相对RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探针的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移,随机引物法,PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。...
...生物素和地高辛用缺口平移法或随机引物法进行标记,以用后者为多。氨乙酰荧光素,磺酸和汞的核苷酸探针标记利用简单的化学反应。产生荧光的物质各有不同,常用的有异硫氰酸荧光素(FITC),也有应用德克萨斯红(texaored)获得满意效果的。但藻红素(...
...探针与扩增了的DNA进行杂交显示和定位,其敏感性可达到显示单个拷贝基因的信号的程度。Bagasra及其同事们利用这一方法,应用32P和生物素标记的核酸探针分别对导致人体免疫缺陷的HIV-1/AIDS病毒DNA的单个拷贝基因经PCR扩增后在外周...
...水浴5min。反应完成,加入酵母tRNA10μg。分别测定参入和游离放射性计数,参入率为97.4%。标记DNA探针经醋酸钠酒精沉淀回收。将沉淀溶于10mmol/l Tris—HCl 、EDTA(pH8.0)100μl。用PCR方法标记的...
...-N-羟基琥珀标记化学修饰的DNA法 五、缺口平移法标记生物素DNA探针(二步法) 六、生物素随机引物标记探针方法 七、异羟基洋地黄毒甙(Digoxigenin)标记核酸探针 八、光敏2,4-二硝基苯(光敏DNP)标记DNA法 九、三硝基苯...
...随机引物标记探针方法 七、异羟基洋地黄毒甙(Digoxigenin)标记核酸探针 八、光敏2,4-二硝基苯(光敏DNP)标记DNA法 九、三硝基苯磺酸(TNBS)标记核酸探针 十、生物素化的RNA探针标记 十一、辣根过氧化物酶标记核酸探针法 ...
...μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min,水洗。(4)酶呈色反应。BRAB法和LAB示是Guesdon及其同事们(1979)建立的,由于这二种方法都需以生物素标记第一抗体,应用不如ABC法普遍。但用于免疫细胞中免疫球蛋白的显示具有...
...形成稳定的杂合体。有时可在5’端添加不与模板互补的序列,如限制性酶切位点或启动因子等,以完成基因克隆和其他特殊需要;引物5’端生物素标记或荧光标记可用于微生物检测等各种目的。有时引物不起作用,理由不明,可移动位置来解决。2.(G+C)%含量...
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