...应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度(详见二十二章 ),另一方面是提高其分辨率,即向电镜水平发展。Jacob(1971)首先用3H标记的核酸RNA探针与DNA杂交并在电镜水平显示获得成功,...
...置于计数器上进行放射性计数。(2)亲合吸附杂交:生物素标记DNA探针与溶液中过量的靶RNA杂交,杂交物吸附到酰化亲合素包被的固相支持物(如小球)上,用特异性抗DNA:RNA杂交物的酶标单克隆抗体与固相支持物上的杂交物反应,加入酶显色底物,这个...
...μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min,水洗。(4)酶呈色反应。BRAB法和LAB示是Guesdon及其同事们(1979)建立的,由于这二种方法都需以生物素标记第一抗体,应用不如ABC法普遍。但用于免疫细胞中免疫球蛋白的显示具有...
...蒸水补足体积至10μl,37℃,15min;三蒸水补足体积至49μl,DNA聚合酶i 5u,混匀,14℃过夜,加0.5mmol/l ED-TA(Ph8.0)1μl终止反应。已标记探针的提纯:10mg/ml tRNA 2μl,10mmol/L...
...维生素H(Riotin,又名生物素)亲合力极高的结合点。给动物饲以大量鸡蛋白所致的维生素H缺乏,就是由于卵白素和大量的维生素H结合所致。维生素H(以下统称生物素)是一种小分子的维生素,分子量为244,系转氨甲酰基化过程中的辅酶,它与卵白素之间有...
...获得反意RNA探针(cDNA);③依照待测核酸的核苷酸序列,应用DNA合成仪合成寡聚核苷酸探针。cRNA和cDNA的常用标记物有32S、32P、3H等放射性核素和荧光素、生物素、地高辛等非放射性物质。组织学应用的原位杂交术主要是染色体...
...利用这一方法,应用32P和生物素标记的核酸探针分别对导致人体免疫缺陷的HIV-1/AIDS病毒DNA的单个拷贝基因经PCR扩增后在外周血单核细胞内显示成功。就算此法对HIV-1感染患者外周血单核细胞检测的阳性率明显高于用单纯原位杂交技术的...
...连接在DNA上以后,再进行AP酶显色。这里SA为Streptavidin(链酶亲合素),BAP为生物素化的磷酸酶,B为生物素(biotin),ABC为Avidin – Biotin - Enzyme com-plex, 即亲合素- 生物素-...
...半衰期短、需要特别的安全防护条件等,限制了同位素标记探针的广泛应用。因此,非同位素标记探针的研制引起重视,自Langer等(1981)合成了生物素化dUTP和NTP类似物以来,开创了用非同位素标记的新领域,用生物素标记核酸探针检测和识别特定的...
...半衰期短、需要特别的安全防护条件等,限制了同位素标记探针的广泛应用。因此,非同位素标记探针的研制引起重视,自Langer等(1981)合成了生物素化dUTP和NTP类似物以来,开创了用非同位素标记的新领域,用生物素标记核酸探针检测和识别特定的...
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