...hybridisa-tion , FISH)的应用在细胞培养和染色体铺片(见二十一章 )中较为广泛。FISH属于非放射性标记,其优点在于简便,快速,其敏感性可与放射性同位素标记核酸探针相等。不少实验室报告应用FISH(2~5kbp探针)可成功地达到...
...系统可快速(2h)检测RNA。(3)磁珠吸附杂交:Gen– probe公司最近应用吖啶翁酯(acridinium ester)标记DNA探针,这种试剂可用更敏感的化学发光来检测。探针和靶杂交后,杂交物可特异地吸附在磁化的有孔小珠(阳离子磁化...
...策略,可轻易将各种β珠蛋白突变型鉴别开,如纯合野生型AA结果为仅有8nt片段,纯合突变型SS则仅可检出3nt片段,而杂合子AS型则两种片段均存在。四、核酸探针的标记和检测(详见每十九章 )分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式,是核酸...
...(一)基本原理在地高辛标记核酸探针广泛用于光镜水平的原位杂交试验并获极为满意的结果后,科学工作者试图将其应用于电镜水平。其基本原理和生物素标记核酸探针-PA-Gold电镜杂交技术的基本原理相似,首先利用地高辛修饰核酸探针,与细胞或组织进行...
...cm处照射30min。用仲丁醇抽提游离生物素,再用丁醇沉淀回收光敏生物素cRNA探针,将其溶于适量的灭菌双蒸水,用紫外分光亮度计测探针的光密度(详第十九章 ),其最佳工作浓度为2μg/ml。切片的制作、预处理、预杂交、杂交和杂交后冲洗的方法同...
...situ DNA hybridisa-tion , FISH)的应用在细胞培养和染色体铺片(见二十一章 )中较为广泛。FISH属于非放射性标记,其优点在于简便,快速,其敏感性可与放射性同位素标记核酸探针相等。不少实验室报告应用FISH(2~5...
...0.5μg加50μlTE(pH8.0)缓冲液中,再加入5μlg生物素-补骨脂素,溶解后,置365nm紫外光下直接照射20min,距离5cm,加等体积TE,移入用TE平衡的Sephadex G—50 柱(高1.0cm),离心法过柱,收集液体即为...
...Prenatal diagnosis),肿瘤和传染性疾病的诊断,生物学剂量测定(biological dosimetry)和病毒学的病原学诊断等。随着核酸探针的制备,标记方法和基本操作方法的不断改进,新的技术不断涌现,相信在不久的将来,原位杂交化学...
...降解(相对RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探针的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移,随机引物法,PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。...
...dTTP标记,因mRNA的多聚(A)尾而影响杂交特异性。寡核苷酸探针多用于核酸“点”突变检测,该探针可用核酸合成仪人工合成。克隆探针一般较长,特异性图18-5 DNA随机引物标记法好,标记量大,杂交检出信号强。合成探针长度短,一般在20-50...
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