...,往往不能满足临床要求。而外源致病生物侵入体内发病时,拷贝数较高,样品取材、核酸提取相对容易,加之诊断分子生物学技术的灵敏度与特异性,使临床应用价值提高。特别是病毒致病日益猖獗,临床诊断的不断需要,及应用试剂盒的不断开发,操作手续的不断简化...
...成千上万的基因序列中获得只有极微含量的特定目的基因或序列,PCR获得的目的序列产物连接在适当的载体上,转化受体细胞,经筛选就能得到目的序列的克隆。现在PCR技术还在不断发展,已知部分序列或未知序列的基因有的也能设计PCR来扩增和克隆,模板核酸...
...应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度(详见二十二章 ),另一方面是提高其分辨率,即向电镜水平发展。Jacob(1971)首先用3H标记的核酸RNA探针与DNA杂交并在电镜水平显示获得成功,...
...随着基因工程研究技术的迅猛发展,新的核酸分子杂交类型和方法在不断涌现和完善。核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂交和液相杂交两种类型。固相杂交是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上,一条反应核酸游离在溶液中。固体支持物有硝酸纤维素...
...1985年创立。该技术利用两个与相反链杂交并随着于靶DNA两侧的寡核苷酸引物经酶促合成特异的DNA片段,包括模板变性,引物退火和引物延伸三个步骤的反复循环,最终两引物所夹靶DNA得到千万倍以上的扩增。因此,PCR技术已成为一项极为有价值的技术...
...,往往不能满足临床要求。而外源致病生物侵入体内发病时,拷贝数较高,样品取材、核酸提取相对容易,加之诊断分子生物学技术的灵敏度与特异性,使临床应用价值提高。特别是病毒致病日益猖獗,临床诊断的不断需要,及应用试剂盒的不断开发,操作手续的不断简化...
...前后感染两种细菌,用核酸内酶酶切PCR扩增的DNA产物,其图谱比酶切细菌其因DNA图谱简单,易于分析,而且前者可直接采用胃粘膜标本处理,易于操作。3.2.2 RAPD和RFLPRAPD技术是九十年代初由Wilions等最早报道的,RAPD是...
...前后感染两种细菌,用核酸内酶酶切PCR扩增的DNA产物,其图谱比酶切细菌其因DNA图谱简单,易于分析,而且前者可直接采用胃粘膜标本处理,易于操作。3.2.2 RAPD和RFLPRAPD技术是九十年代初由Wilions等最早报道的,RAPD是...
...放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,即酶促反应标记法和化学修饰标记法。酶促反应标记探针是用缺口平移法,随机...
...D-loopregion)的“DNA”指纹图”。PCR技术由Mullis等首创(详见第二十二章 )。它又称为DNA体外扩增技术,是用DNA聚合酶在体外扩增一段DNA顺序达百万倍以上。这样就可直接观察而不用印迹杂交法。这项技术的基本原理是,将有待扩增的DNA分子...
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