...1．蛋白酶（Proteinawe K, Pro.K） 蛋白酶K主要用于杂交前标本处理，其作用是使组织达到一定消化，利于检测分子的穿透，从而提高检测方法的敏感性，但各种组织在不同条件下消化程度不一，因此，具体应用时，应根据组织种类、温度确定...
...技术的高度敏感性，分子杂交在临床性病病原体诊断上具有广泛的前景。DNA探针（包括cDNA探针）有三大优点：第一，这类探针多克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽，制备方法简便。其次，DNA探针不易降解（相对RNA而言），一般能有效抑制DNA...
...分子杂交在临床微生物诊断上具有广阔的前景。细菌的基因组大小约5×106bp，约含3000个基因。各种细菌之间绝大部分DNA是相同的，要获得某细菌特异的核酸探针，通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法，即将细菌DNA切成小片段后分别克隆得到...
...检测系统，通过组织化学或免疫组织化学方法在核酸原有的位置进行细胞定位。这一技术为研究单一细胞中编码各处蛋白质、多肽的相应mRNA的定位提供了手段，使从分子水平研究细胞内基因表达及有关因素的调控提供了有效的工具。可视为组织化学或免疫细胞化学中革...
...使用前最好加热至50℃，使其充分溶解后再加入探针分子。至于探针的浓度视实验目的、探针类型及标记方法而异。通常RNA探针分子浓度为0.5～2μg/ml，DNA探针浓度为1μg/ml,此外，如使用35S标记的探针，还需加入终浓度为100mmol/...
...检测系统，通过组织化学或免疫组织化学方法在核酸原有的位置进行细胞定位。这一技术为研究单一细胞中编码各处蛋白质、多肽的相应mRNA的定位提供了手段，使从分子水平研究细胞内基因表达及有关因素的调控提供了有效的工具。可视为组织化学或免疫细胞化学中革...
...进行原位杂交的组织或细胞标本常需经固定处理。尽管许多化学物质对组织/细胞有固定作用，但核酸原位杂交的理想固定液应具备如下特点：①能很好地保持组织细胞的状态；②对核酸无抽提、修饰及降解作用；③不改变被检核酸分子在组织细胞内的定位；④对核酸及...
...核酸分子杂交方法 ◦ （二）固相核酸分子杂交类型 ◦ （三）固相膜核酸杂交的几点说明 ◦ （四）液相核酸分子杂交类型 六、核酸分子杂交实验因素的优化 第四节 石蜡包埋组织的DNA提取及其应用 一、石蜡包埋组织DNA提取的基本方法 二、影响...
...如前所述，由于核酸探针的种类和标记物的不同，在具体应用的技术方法上也各有差异，但其基本方法和应用原则大致相同。大致可分为：①杂交前准备，包括固定、取材、玻片和组织的处理，如何增强核酸探针的穿透性、减低背景染色等；②杂交；③杂交后处理；④...
...标记技术 （二）核酸探针的非放射性标记技术 (三）非放射性探针的显示体系 五、核酸分子杂交的类型 （一）固相膜核酸分子杂交方法 （二）固相核酸分子杂交类型 （三）固相膜核酸杂交的几点说明 （四）液相核酸分子杂交类型 六、核酸分子杂交实验因素的...
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