1.葡聚糖凝胶的某些技术数 据 种类 干颗粒直径(μ) 分子量分级范围 床体积毫升/克干分子筛 得水值 溶胀最少平衡时间(h) 柱头压力(kPa)(2.5cm直径柱) 肽及球形蛋白质 葡聚糖(线性分子) 室温 沸水浴 Sephadex G-10 40~ 120 ~700 ~700 2~ 3 1.0±0.1 3 1 Sephadex G-10 40~ 120 ...
该技术方法是用生物素分别标记抗体和酶,然后以抗生物素为桥,把两者连接起来(图6-2)。 图6-2B RAB技术 检查抗原时,先用生物素标记的抗体与细胞(或组织内)的抗原反应,洗去未结合的抗体,加入抗生物素孵育后,洗去未结合的抗生物素,再加入已标记酶的生物素孵育,洗片,以细胞化学方法呈色反应。
70年代以来,由于免疫组织化学方法的广泛应用,在技术方法上不断得以改进,涌现了一批新的技术方法,其特点为一些具有双价或多价结合力的物质如如植物凝集素(Lectin)、生物素(Biotin)和 葡萄 球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A, SPA)等被应用于免疫细胞化学技术,从而建立了SPA—HRP法、ABC法、BRAB法和LAB法等。...
根据标记物的不同,免疫细胞化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术,免疫酶细胞化学技术,免疫铁蛋白技术,免疫金-银细胞化学技术,亲和免疫细胞化学技术,免疫电子显微镜技术等。近些年来,核酸分子原位杂交技术采用生物素、地高辛等非放射性物质标记探针,和免疫细胞化学技术密切结合,发展为杂交免疫细胞化学技术。不同的免疫细胞化学技术,各具有独特的试剂和方法,但其基本技术方法是...
以生物素标记抗体作第一抗体,酶标记抗生物素作为第二抗体(图6-3)。操作步骤如下: 图6-3 LAB技术 (1)切片在含有25~50μg/ml生物素标记抗体(PBS液稀释)中孵育1h,室温。 (2)PBS洗2次,每次5min。 (3)用20~50μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min,水洗。 (4)酶呈色反应。 BRAB法和LAB示是Guesdo...
免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献,但由于光学分辨率的限制,不可能从细胞超威结构水平观察和研究免疫反应。因此,Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白(ferritin)标记抗体的方法,为在细胞超威结构水平研究抗原抗体反应提供了可能。在此基础上,相继发展了杂交抗体技术、铁蛋白抗铁蛋白复合物技术、蛋白A-铁蛋白标记技术、免疫...
免疫金银技术(Immunogold—sliver Technique)是在免疫金基础上发展的新兴的先进的免疫细胞化学检测技术,它比免疫荧光,免疫酶标技术有许多独特的优点。 1.制备方法简单,易行。 2.标记简单 抗体、凝集素、酶、SPA、激素等很容易通过物理吸附作用与胶体金颗粒相结合形成稳定的金标复合物。由于在标记过程中不需要经过任何化学方法交联,抗体的生物...
免疫细胞化学技术在继续改进和完善中,新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外,80年代,新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章 叙述,本节 仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【半抗原交联抗体法(Hapten ?CCoupled techn...
自Gall和Pardue建立了原位杂交技术以来近20余年内,这一技术为基因的定位和表达、基因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病毒学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供了极其宝贵的资料,发挥了其它技术难以取代的作用。近年来,此一技术的应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度(详见二十二章 ),另一方面是提高...
70年代以来,由于免疫组织化学方法的广泛应用,在技术方法上不断得以改进,涌现了一批新的技术方法,其特点为一些具有双价或多价结合力的物质如如植物凝集素(Lectin)、生物素(Biotin)和 葡萄 球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A, SPA)等被应用于免疫细胞化学技术,从而建立了SPA—HRP法、ABC法、BRAB法和LAB法等。...
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