...简称为原位杂交PCR(PCr in situ, PCRIS)。在本书二十二章 中曾介绍了PCR技术,它是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的无细胞克隆技术,基本步骤包括高温变性,低温退火适温延伸三个步骤的反复热循环,其效率可使几个拷贝...
...PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法,主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物...
...结核分枝杆菌在体外培养周期长,阳性检出率不高,因此对临床的早期诊断和确定药物治疗都带来一定的困难,应用聚合酶链反应(PCR)技术检测结核分枝杆菌,能大大提供结核分枝杆菌的检出率和检出特异性,有利于临床即使治疗。标本采自患者的痰、支气管...
...在一个典型的PCR反应体系中需加入:适宜的缓冲液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐热性多聚酶、Mg2+和两个合成的DNA引物。模板DNa 94℃变性1min,引物与模板40~60℃退火1min,72℃延伸2min。在首次循环前模板预...
...通过上述内容。可以看出有许多因素可以影响PCR的特异性,在此我们作一归纳,供大家参考:①退火步骤的严格性:提高退火温度可以减少不匹配的杂交,从而提高特异性。②减短退火时间及延伸时间可以减少错误引发及错误延伸。③引物二聚体是最常见的副产品,...
...加入Taq DNA聚合酶0.5~2u,在旋涡混合器上混匀简单离心一下,加入35μl石蜡油。放入65℃水浴2min,取出,立即进入PCR循环:91℃变性30s,51。C退火1min,68℃延伸2min。重复上述过程15次。最后将反应管置65℃...
...尿蛋白定性试验阳性,则应进一步进行尿蛋白定量试验。尿蛋白定量是指准确测定24h内全部尿液中的蛋白质浓度。尿蛋白定量测定有助于泌尿系统疾病的诊断和鉴别诊断,了解肾脏病变的程度。留尿时要求适量添加防腐剂。 大于150mg/24h,为蛋白尿。 ...
...大宗病例的检出率为47.5%~49.6%。国内已应用定量PCR测定、短串联重复序列连锁分析检出DMD基因携带者。对于点突变型DMD的诊断尚缺乏系统的研究。 4.肌电图:为肌源性改变,病变肌肉呈低电位,波形持续时间缩短,而多相波增高。其他尚应做...
...注射的乙肝疫苗已经“失效”,必须注射加强针。这意味着湖北省新的乙肝检测正在取代老方法,乙肝检测将逐步由定量取代定性。 武汉大学中南医院检验科李瑞炎医生介绍,按常规监测方法,乙肝检测的结果只有“阴性”和“阳性”,以确定是否感染乙肝病毒,医学上...
...粪便脂肪定量检查,可以了解消化、吸收功能,协助诊断消化系统疾病。 粪便脂质主要来源是食物,部分来源于胃肠道分泌、细胞脱落各细菌的代谢产生。由于脂肪的消化或吸收能力减退,粪便中的总脂量可以大大增加。 若24小时粪便中总脂量超过6g即为脂肪泻...
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