...组织中的靶DNA或RNA进行杂交，然后该寡核苷酸探针充当引物的作用，在Kelow多聚合酶的催化作用下，将生物素（或地高辛、荧光素）标记的核苷酸编入，以达到原位显示的目的。PRINS技术具有3个方面的优点：首先由于探针在杂交时是未标记的，仅在...
...基本操作方法1．Y染色体3H标记DNA探针原位杂交技术（1）探针标记，以3H标记Y染色体DNA探针（详见第19章 ）。（2）原位杂交①RNA酶的前处理：取1ml RNA酶保存液（10mg/ml）于250ml 2×SSC内，预热于37℃水浴中...
...质量控制方面比生物素标记技术要优越，可以检测出人基因组DNA中的单拷贝基因。地高辛标记法显示的颜色为紫蓝色（标记碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶显色系统），有较好的反差背景。核酸探针根据标记方法的不同可粗略分为放射性探针和非放射性探针两类。根据探针...
...应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度（详见二十二章 ），另一方面是提高其分辨率，即向电镜水平发展。Jacob（1971）首先用3H标记的核酸RNA探针与DNA杂交并在电镜水平显示获得成功，...
...转变为光能放出，称为化学发光。杂交后与探针结合的酶催化相应的发光剂，经增强剂将光能放大，在X光片上显示杂交信号。此方法灵敏度与同位素标记水平相当，简便快速，安全，是一种特异性好的检测手段，具有广泛的应用前景。HBV-DNA的HRP标记方法：...
...32P]dCTp 1.5×106Bq，dATp 、dGTP和dTTP各200μmol/L。标记反应包括3个步骤：（1）变性：反应管在95℃水浴5min，然后离心；（2）退火：37℃水浴2min；（3）延伸：加入DNA聚合酶i 1u，37℃水浴...
...光敏DNP由一连接臂组成，一端是2，4-二硝基苯，另一端有芳基叠氮化合物。此法适用于含氨基检测基团。其敏感性和光敏生物素标记探针相同，检测时需要抗DNP抗体和免疫化学显色。标记方法：（1）DNA不心变性，必须溶于水中，取2～10μg10μ...
...粗线示标记部分探针的标记也可以采用随机引物法，即向变性的探针溶液加入6个核苷酸的随机DNA小片段，作为引物，当后者与单链DNA互补结合后，按碱基互补原则不断在其3’OH端添加同位素标记的单核苷酸，这样也可以获得比放射性很高的DNA探针。二、...
...推出多种非放射性探针标记试剂盒，在国内也已具备生物素类标记物的生产能力，并有相应试剂出售。目前，非放射性标记物有下述几类：金属如Hg，荧光物质如FITC；半抗原如地高辛；生物素；酶类如辣根过氧化物酶（HRP）。半乳糖苷酶或碱性磷酸酶（AKP...
...探针与互补链的反应则是根据杂交体的长短不同，通过氢键几十、几百甚至上千个位点上的结合。这就决定它的特异性。基因探针根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探针两大类，根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针、RNA探针、cDNA探针、...
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