某些抗原可以用荧光素标记,制成荧光抗原,标记荧光素的方法与制备荧光抗体方法相同。用荧光抗原可以直接检查细胞或组织内的相应抗体,特异性较好,敏感性较差。染色方法同荧光抗体染色的直接法。由于多数抗原难以提纯或量少不昂贵,一般很少采用此法。
一、标本制作
本法应用直接法或间接法的原理和步骤,可对活细胞在试管内进行染色,常用于T和B细胞、细胞培养物、瘤细胞抗原和受体等的检查和研究,阳性荧光主要在细胞膜上。FACS即采用此法原理。
...次固定液,过夜。 (2)随后,作10~40μm的冰冻切片,放入第一抗体血清作用12~18h,4℃,用含蔗糖的PBS洗数次。 (3)置于HRP标记抗体液(第二抗体)4 ℃ 过夜。然后用4℃含蔗糖PBS反复冲洗数次。4 ℃ 浸漂过夜。 (4)2.5%戊二醛(pH7.4磷酸缓冲液)再固定1h,4 ℃ 用含蔗糖PBS反复冲洗去戊醛,每次5min,共洗3次。 (5)D...
...2各90ng,模板DNA0.1μg,[α- 32 P]dCTp 1.5×10 6 Bq,dATp 、dGTP和dTTP各200μmol/L。标记反应包括3个步骤: (1)变性:反应管在95℃水浴5min,然后离心; (2)退火:37℃水浴2min; (3)延伸:加入DNA聚合酶i 1u,37℃水浴18min。重复上述变性、退火、延伸过程1~2次,分别进行其标...
1.单面法 以不同直径的金粒分别标记两种不同的抗体,以间接法先染第一种抗体,洗净后再染第二抗体。 2.双面法 以不同直径的金粒标记的抗体于镍网的两面分另进行免疫染色。本法的优点是可防止两种金标记的抗体的相互干扰,又可防止第一次应用的一抗与其相应的抗原相结合,占据了空间,第二次应用的抗体没有适合的空间使之与相应的抗原相结合。 3.异种动物抗原—抗体染色法 如一...
角膜 、 结膜 上皮 损伤或有 溃疡 时,可被 荧光素 染色 ,方法是点 无菌 的1%荧光素液于 结膜囊 内,然后用 生理盐水 冲洗,亦可用玻璃棒蘸少量药液于结膜囊内,进行观察。此时可见角膜、结膜破损处有嫩绿色着色,上皮完整处不染色。如有 角膜瘘 ,点荧光素后作轻压 眼球 ,可见角膜表面布满黄绿色荧光素,而在瘘管处则有液体流出,状如清泉外流。操作时注意勿污染...
(1)将整封染色体铺片放置于金网上,在70%的酒精蒸汽固定4~15h,空气干燥。 (2)以强碱使DNA变性,将金网置于2×SSC内(应用0.1n NaOH调整至pH12),室温,2min。 (3) 脱水 ,以70%和95%酒精各冲洗3次,空气干燥。 (4)杂交,金网覆于平面 玻璃 皿( Petri dish)内的杂交液滴上,每滴约10~15μl,将此小碟置于...
...越来越多的实验结果表明Hp与慢性胃和 溃疡 病有密切关系,可能是这些疾病的致病因素之一。目前诊断Hp的方法主要有组织培养法、尿素酶试验和各种染色法。鉴于这些方法繁琐、费时、须胃镜取材才能完成等,寻找一种敏感性高、特异性好、快速且简便的诊断Hp的方法,是目前急需研究和解决的问题。本文报道建立一种新的免疫酶技术—“双特异抗体”酶免疫染色法,现将结果报告如下。 1...
...越来越多的实验结果表明Hp与慢性胃和 溃疡 病有密切关系,可能是这些疾病的致病因素之一。目前诊断Hp的方法主要有组织培养法、尿素酶试验和各种染色法。鉴于这些方法繁琐、费时、须胃镜取材才能完成等,寻找一种敏感性高、特异性好、快速且简便的诊断Hp的方法,是目前急需研究和解决的问题。本文报道建立一种新的免疫酶技术—“双特异抗体”酶免疫染色法,现将结果报告如下。 1...
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