...通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法:1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA探针,检测经Northernblot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。2.应用...
...最多,最好的技术。一、Sanger双脱氧链终止法原理通常DNA的复制需要:DNA聚合酶,单链DNA模板,带有3'-OH末端的单链寡核苷酸引物,4种dNTP(dATP、dGTP、dTTP和dCTP)。聚合酶用模板作指导,不断地将dNTP加到...
...Southern印迹杂交示意图当含有特定基因片段已原位转移到膜上后,即可与同位素标记了的探针进行杂交,并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行,袋内放置上述杂交滤膜,加入含有变性后探针的杂交溶液后,在一定温度下让单链探针DNA与固定于膜上的...
...光敏DNP由一连接臂组成,一端是2,4-二硝基苯,另一端有芳基叠氮化合物。此法适用于含氨基检测基团。其敏感性和光敏生物素标记探针相同,检测时需要抗DNP抗体和免疫化学显色。标记方法:(1)DNA不心变性,必须溶于水中,取2~10μg10μ...
...酶活性。第三,DNA探针的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移法、随机引物法、PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。(二)cDNA探针cDNA是指互补于mRNA的DNA分子(complementary DNA)。cDNA是由...
...硝酸纤维素滤膜上,再用放射性或非放射性标记物标记的探针杂交。点杂交还有助于检测突变DNA的突变类型,用于人类遗传病诊断和某些基因的分型。放射性同位素32P标记的寡核苷酸探针检测的敏感性、特异性和方法的可靠性均不容怀疑,对人们认识某些疾病与...
...DNA上而不被洗脱。核酸探针可以用放射性核素标记,结合了放射性核酸探针的菌落集团可用放射性自显影(auroradiography)法指示出来,核酸探针也可以用非放射性物质标记,通常是经颜色呈现指示位置,这样就可以将含有目的序列的菌落挑选出来。...
...10之间存在着一个2.6kb的缺失,见图20-4。将产物用EcoR1酶切,得到的产物电泳图谱见图20-5。最后用PB、PC、PD、PE4对引物,以正常基因的长链PCR产物为模板,用PCR法获得外显子7、8、9、10的探针,将这些探针分别与...
...10之间存在着一个2.6kb的缺失,见图20-4。将产物用EcoR1酶切,得到的产物电泳图谱见图20-5。最后用PB、PC、PD、PE4对引物,以正常基因的长链PCR产物为模板,用PCR法获得外显子7、8、9、10的探针,将这些探针分别与...
...四环素淋球菌(TRNG)tetm基因的寡核苷酸探针,该基因介导抗四环素,用酶化学发光标记,液相杂交,4h内可直接从临床标本中检出含有tetm基因的1.5×104CFu的淋球菌。(2)染色体探针染色体探针包括已知功能的基因探针,如菌毛DNA探针...
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