...浓度等也会影响蛋白质的吸附。(二)免疫金的制备1.用0.2mol/LK2CO3或0.1mol/LHC1调节胶体金溶液的pH至选定值。原则上可选择待标记蛋白质等电点,也可略为偏碱。但通常最适反应pH往往需经多次试验才能确定。在调节胶体金的pH...
...(1)新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。(2)PBS(pH7.5)冲洗3min×2,加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3,离心沉集细胞。(3)将细胞团置于小纸板上,入液氮冷却的Freon中,取出入冷冻蚀刻仪中进行...
...水平研究抗原抗体反应提供了可能。在此基础上,相继发展了杂交抗体技术、铁蛋白抗铁蛋白复合物技术、蛋白A-铁蛋白标记技术、免疫酶技术及胶体金技术等。电子显微镜免疫细胞化学技术(以下简称免疫电镜技术技术)区别于免疫细胞化学和常规电镜技术主要在以下...
...之前必须对它的特异性,敏感性进行鉴定。鉴定举例,用阳性抗原片,脱蜡至水,胰蛋白酶消化,加第一抗体(多克隆或单克隆),一般过夜再加标记抗同一抗特异性抗体结合的胶体金溶液(多克隆或单克隆抗体标记的胶体金)详细方法步骤见后IgGS法,一般做1:2...
...银也可定位。(11)铀—铅电镜染色,电镜观察。免疫金银法敏感度高,金银颗粒电子密度高,反差强;应用包埋前染色可先定位阳性反应部位再作电镜超薄切片,获得阳性反应机率高,特别适用于含微量抗原的部位,如突触等。其不足是须经暗室显影,手续较烦杂,...
...的),它的底物是3,3'-二氨基、联苯胺(DAB)和H2O2,HRP使DAB氧化形成棕黄色产物,可在光镜和电镜下观察(图1-6)。铁蛋白和胶体金标记抗体与抗原的结合,也可在光镜和电镜下观察(图1-7)。图1-6 大鼠腺垂体免疫组织化学(...
...荧光素标记的α-眼镜蛇毒素成功地显示了乙酰胆碱受体(Acetycholine receptor clusters)在鸟肌上的发育规律。近年来,应用免疫细胞化学技术进行受体再循环的免疫电镜观察,取得了令人瞩目的进展。Geueze利用胶体金-蛋白...
...组织背景因素的影响,在抗原或抗体的检测中显示出高度的特异性。5.敏感性高由于金颗粒的电子密度很大特别适合透射电镜及扫描电镜,因此,免疫金银法用于电镜,其检测抗原或抗体率远远超过酶反应物,从而大大改进了免疫细胞化学技术在电镜水平上的分辨率。光镜...
...%蔗糖或甘油溶液作密度梯度离心,分带收集不同大小颗粒的胶体金标记蛋白制剂。几种免疫金探针离心所用转速(见表5-6),离心纯化时所用转速见表5-7,胶体金的OD值见表5-8。表5-6 几种免疫金探针离心时所用转速参考表胶体金颗粒直径(nm)...
...可以粗略估计制得的金颗粒的大小。当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的粒径。结制备的胶体金最好作电镜观察,并选一些代表性的作显微摄影,可以比较精确地测定胶体金的平均粒径。胶体金在洁净的玻璃器皿中可较长时间保存,加入少许防腐剂(如...
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