胶体金标记蛋白质的原理，一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时，蛋白质呈电中性，此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小，但蛋白质分子的表面张力却最大，处于一种微弱的水化状态，较易吸附于金颗粒的表面，由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，而使胶体金处于稳定状态，如果＝低于蛋白质的等电点时，蛋白质带...
从不同组织细胞或血细胞中提取DNA是进行基因诊断的先决条件。制备DNA的原则是既要将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净，又要保持DNA分子的完整。蛋白酶K的应用使这两个原则得到了保证。在提取DNA的反应体系中，SDS是离子型表面活性剂，主要作用是：（1）溶解膜蛋白而不破坏细胞膜；（2）解聚细胞中的核蛋白；（3）与蛋白质结合，使蛋白质变性而沉淀下来。蛋白酶K可将...
国外已有数篇Hp单克隆抗体研制成功的报道。Negrini等把从培养皿中分离的6株Hp混合后免疫小鼠，32d后将小鼠脾细胞与小 鼠骨 髓瘤细胞P 3 X63.Ag8.653融合，细胞融合悬液于96孔板上培养生长杂交瘤细胞集落，用整个Hp作靶细胞的间接ELISA法筛选抗体，共获得21株阳性单克隆抗体，其中以CB-26为最好。 研究证明单克隆抗体CB-26具有很强...
1975年Kǒhler和Milstein首先报道用细胞杂交技术使经绵羊红细胞（SRBC)免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立起第一个B细胞杂交瘤细胞株,并成功地制得抗SRBC的单克隆抗体（monlclonalantibody,McAb）。迄今世界已研制成数以千计的McAb。 单克隆抗体的理化性状高度均一，生物活性单一，与抗原结合的特异性强，便于人为处理和质...
...相附。因此环境pH和离子强度是影响吸附的主要因素，其他如胶体金颗粒的大小、蛋白质的分子量及蛋白质浓度等也会影响蛋白质的吸附。 （二）免疫金的制备 1．用0.2mol/LK 2 CO 3 或0.1mol/LHC1调节胶体金溶液的pH至选定值。原则上可选择待标记蛋白质等电点，也可略为偏碱。但通常最适反应pH往往需经多次试验才能确定。 在调节胶体金的pH值时应注意...
制备单克隆抗体是复杂而费时的工作，整个技术流程如图11-2。 （一）抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取1×10 7 个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。 选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小...
酮内酯类抗生素 作为一类全新的药物，其结构由 大环内酯类抗生素 衍生而来，在３位引入酮基，代替中性糖基，提高了弱酸环境的稳定性。由于结构的改变使得该类药物的抗菌作用增强，尤其对呼吸道感染病原菌耐药者的抗菌活性明显增高。酮内酯类对 肺炎链球菌 、Ａ组／Ｂ组溶血性链球菌、 草绿色链球菌 均具高度抗菌活性，包括上述细菌对 红霉素 耐药 者， 青霉素 不敏感肺炎链球...
酮内酯类抗生素 作为一类全新的药物，其结构由 大环内酯类抗生素 衍生而来，在３位引入酮基，代替中性糖基，提高了弱酸环境的稳定性。由于结构的改变使得该类药物的抗菌作用增强，尤其对呼吸道感染病原菌耐药者的抗菌活性明显增高。酮内酯类对 肺炎链球菌 、Ａ组／Ｂ组溶血性链球菌、 草绿色链球菌 均具高度抗菌活性，包括上述细菌对 红霉素 耐药 者， 青霉素 不敏感肺炎链球...
核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备： （1）直接分离基因核酸：即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。 （2）化学合成基因核酸：即以单核苷酸为原料，以固相磷酸三酯法合成某一结构完全清楚，分子量较小的寡核苷核。 （3）酶促合成核酸：在真核细胞中获得特异的结构基因。常用方法是以mRNA为模板，利用逆转录酶合成单链cDNA，再以...
...Higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的CaCl 2 或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。 用CaCl 2 制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞，常用于成批制备感受态细菌。本法适用于大多数大肠杆菌菌株，且迅速、重复性好。操作过程简述如下。 1．从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌DH52），或1ml新鲜...
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