...1．基因转移方法（1）特异正常基因的分离与克隆：应用重组DNA和分子克隆技术结合基因定位研究成果，已有不少基因并将会有更多人类基因被分离和克隆，这是基因治疗的前提，在当代分子生物技术条件下，一般来说，只要有基因探针和准确的基因定位，任何...
...（一）直接检出病毒核酸1．标本滴加到硝酸纤维素膜上，病毒DNA结合到膜上，在原位进行硷变性处理后，有放射标记的已知病毒DNA片段杂并，两条单股核酸按硷基到补原则结合成双股，经放射自显影，阳性结果出现斑点状杂交信号。含轮状病毒的粪便标本经热...
...切的一个DNA片段时，一般的做法是如图23-4所示。图23-4 pBR322克隆DNA片段的程序从图23-4可见，外源DNA片段同pBR322都经Bam HⅠ酶切，所以有相同的单链“粘性末端”，通过DNA连接酶可以构成重组DNA分子。由于...
...1.为什么说细胞对DNA损伤的修复能力对细胞的生存是至关重要的?2.体内那些因素会导致DNA结构的变化?细胞能采取那些办法保持DNA结构的稳定性?3.那些环境因素容易损伤生物体内的DNA?损伤有那些方式和类型?结果对生物细胞会有些什么影响...
...由于外源DNA的进入而使细胞遗传性改变称为转化，早在1943年，Avery等就发现有毒肺炎双球菌的DNA与无毒肺炎双球菌共培养后产生有毒性的肺炎双球菌后代的转化现象。但DNA进入细胞的效率很低，在分子生物学和基因工程工作中可采取一些方法...
...检测遗传疾病的技术发展迅速。DNA技术领域发展得特别快。最近，一个称之为人类基因组计划的工作正在进行，其内容是识别和绘出人类染色体上所有的基因。基因组是一个人的全套基因。每个染色体的每个位点上都有一个基因。同一位点的功能每一个人都是同样的...
...转化是受体菌直接摄取供体菌游离的DNA片段，通过与染色体重组，获得了供体菌的部分遗传特性。转化的DNA可以是细菌溶解后释放的，也可用人工方法抽提而获得。转化首先在1928年由Griffith在肺炎球菌中发现，以后在葡萄球菌、嗜血杆菌也先后...
...DNase I作用下在一双链DNA上制造一些缺口，再利用大肠杆菌DNA聚合酶I 的5’—3’外切酶活性依次切除缺口下游的核酸序列，同时将四种脱氧三磷酸核苷（其中一种用放射性标记）利用该酶5’—3’聚合活性补人缺口，使缺口逐个平称并在平移过程中形成...
...1.DNA复制起始有哪些特点?2.原核生物与真核生物中的DNA聚合酶有哪些种类，它们各自的功能是什么?3.DNA复制时前导链与随从链的合成有哪些不同?4.DNA拓扑异构酶的作用如何?5.连接酶催化的连接反应与DNA聚合酶5′→3′聚合活性...
...（一）试剂（1）引物：决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同，选用不同引物，每种病原微生物都有自己特异的引物。（2）耐热的DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温90℃-100℃。（3）10×PCR缓冲液：500mmol/l...
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