...将凝胶中分离好的DNA片段转移至尼龙膜上;④经变性处理后用同位素标记的探针进行分子杂交。经放射自显影,得到显影带(bands)。即可得知分子量大小不同的DNA片段(图20-9)。图20-9用RFLP进行组织定型比较三个标本的组织定型RFLP...
...放射免疫分析技术,是把放射性同位素测定与抗原、抗体间的免疫化学反应两种方法巧妙地结合起来所形成的一种超威量物质的测定方法。RIA的基本原理,是利用标记抗原(*Ag)和非标记抗原(Ag)对特异性抗体(Ab)发生竞争性结合。竞争结合反应可用...
...不变。转移结束后,经过80℃烘烤的DNA,将原位地固定于膜上。图13-6 Southern印迹杂交示意图当含有特定基因片段已原位转移到膜上后,即可与同位素标记了的探针进行杂交,并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行,袋内放置上述杂交...
...在同一标本上有两个抗原需要同时显示(如A抗原和B抗原),A抗原的抗体用FITC标记,B抗原的抗体用罗达明标记,可采用以下染色方法:1.一步法双染色 先将两种标记抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。2.二步法双染色 先用RB...
...纵坐标,蛋白质用量为横坐标作一曲线,取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。图5.2中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适稳定量为45μg/ml。图5-2 蛋白最适稳定量示意图(2)目测法:以目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量...
...某些抗原可以用荧光素标记,制成荧光抗原,标记荧光素的方法与制备荧光抗体方法相同。用荧光抗原可以直接检查细胞或组织内的相应抗体,特异性较好,敏感性较差。染色方法同荧光抗体染色的直接法。由于多数抗原难以提纯或量少不昂贵,一般很少采用此法。...
...核酸又称多核苷酸,组成DNA的脱氧核糖核苷酸主要为四种,即dAMP、dGMP、dCMP及dTMP;组成RNA的核糖核苷酸主要有AMP、GMP、CMP及UMP四种。对两种核酸的组成可简写如下:DNA=(碱基-脱氧核糖-磷酸)n;RNA=(...
...(1)新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。(2)PBS(pH7.5)冲洗3min×2,加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3,离心沉集细胞。(3)将细胞团置于小纸板上,入液氮冷却的Freon中,取出入冷冻蚀刻仪中进行...
...短的重复顺序分别长16、17、32、33、37、41、62、64和376bp,但这些重复顺序几乎都共有一种“核心顺序”。“核心顺序”长10~15bp。如果人工合成很短的重复顺序作为DNA分子杂交的探针,同经限制性内切酶酶切的人体DNA作...
...同位素示踪方法这一类方法主要是利用让患者口服同位素标记的尿素,以观察胃中Hp分解尿素的能力,籍此判断患者是否感了Hp及其感染的程度,这类试验现有两类三种。3.1 呼气试验这一类试验首先是Graham根据上述道理设计,于1987年首次报道的。...
所有搜索结果仅供参考,如需解决具体问题请咨询相关领域专业人士。