...善中,新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外,80年代,新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章 叙述,本节 仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【半抗原交联抗体法(Hapten ?CCoupled techniques)】 近年来,为提高...
淋巴细胞是免疫系统中重要的免疫活性细胞,其活化过程的信号转导(signal transduction)及其分子基础极为复杂,是目前分子免疫学及免疫生物学中研究的热点。目前对T淋巴细胞活化过程中信号转导及其分子基础的研究较深入,而对B细胞的研究资料还较缺乏。本章着重介绍T淋巴细胞活化过程中信号转导的分子基础。 所谓信号转导是指外部的信号通过细胞膜上的受体蛋白传...
从生物组织细胞提取出全部DNA,用物理方法(超声波、搅拌剪力等)或酶法(限制性核酸内切酶的不完全酶解)将DNA降解成预期大小的片段,然后将这些片段与适当的载体(常用噬菌体、粘粒或YAC载体)连接,转入受体细菌或细胞,这样每一个细胞接受了含有一个基因组DNA片段与载体连接的重组DNA分子,而且可以繁殖扩增,许多细胞一起组成一个含有基因组各DNA片段克隆的集合体...
...失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以,蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA(以抑制依赖于Mg 2+ 的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/l Ca 2+ 而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT(pH8.0)至终浓度为2mmol/L...
(一) DNA 损伤的原因 1.DNA 分子 的自发性损伤 (1)DNA复制中的错误 以DNA为模板按 碱基配对 进行DNA复制是一个严格而精确的事件,但也不是完全不发生错误的。碱基配对的错误频率约为10-1-10-2,在DNA 复制酶 的作用下 碱基 错误配对频率降到约10-5-10-6,复制过程中如有错误的 核苷酸 参入,DNA 聚合酶 还会暂停催化作用...
胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面,由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带...
大量生产单克隆抗体的方法主要有两种: (1)体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞,从一清液中获取单克隆抗体。但此方法产量低,一般培养液内抗体含量为10~60μg/ml,如果大量生产,费用较高。 (2)体内接种杂交瘤细胞,制备 腹水 或血清。 ①实体瘤法:对数生长期的杂交瘤细胞按1~3×107/ml接种于小鼠背部皮下,每处注射0.2ml,共2~4点。待肿瘤达到...
...β)、内皮素等皆可对系膜细胞、上皮细胞及内皮细胞起作用。使用其合成及分泌多种细胞因子如血小板活化因子、前列腺素E2、白细胞介素-1、6、8等。人们可应用分子杂交免疫细胞化学技术,探知系膜细胞、上皮细胞或内皮细胞中相应细胞因子mRNA的表达,从而了解在不同肾小球疾病中各种细胞功能的变化。对肾小球体外培养细胞的分子生物学研究,开拓了研究肾小球疾病机制的广阔领域。
除了上述四为类 粘附 分子 外,还有一些粘附分子目前尚未归类,包括一组作为selectin分子的 配体 的CD15、CD15s(s-Lewis),此外,还有CD44、MAd、MLA等粘附分子,兹列于表6-7。 粘附分子参与机体许多重要的 生理 和 病理 过程,主要包括:①通过表达于 白细胞 粘 附分 子CD11a/CD18、CD11b/CD18、CD11c/...
...报道,这些蛋白中有2种蛋白即肺炎球菌表面蛋白A和寡肽结合脂蛋白AmiA以往就已经被鉴定过,而第3种蛋白PpmA是新近鉴定的一种蛋白异构酶同源分子, 可以诱导具有最高调理吞噬活性的抗体产生。 Hermans研究小组发现PpmA诱导的物种特异性抗体可以与肺炎链球菌的不同菌株交叉反应,结合PpmA有限的序列变异及其在细胞表面的位置,研究人员推论:PpmA可能成为未...
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