...分析、探针制备等。注意事项:①DNA样品纯度高,Taq酶(和Klenow酶)有逆转录酶活性,DNA和RNA不能混在一起。②设计的引物分子内(特别3′端)和引物,1,2分子间不形成双链。选择性好,不增幅目的DNA以外区域的DNA。引物的G+C...
...CF)的死婴,石蜡包埋组织是唯一的材料来源。应用CF基因标记引物,对患儿和其父母的DNA分别进行PCR扩增。扩增产物用相应内切酶消化并检测限制性片段多态性。结果显示父母和患儿在同一位点上有意义,表明患儿遗传有突变型CF基因,最后证实了CF的...
...就是由很多单核苷酸聚合形成的多核苷酸,核苷酸可被水解产生核苷和磷酸,核苷还可进一步水解,产生戊糖和含氮碱。因此,核酸是由含氮碱、戊糖及磷酸三种成分组成。含氮碱(简称碱基):核酸中的含氮碱简称碱基,是嘌呤碱(purine)与嘧啶碱(...
...此法是先进行冷冻断裂,再做免疫标记,从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。(1)临界点干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h,PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液,可加入30%BSA后加入1%戊二醛,使BSA...
...顺序不同所决定。这种碱基顺序的差别造成限制性内切酶识位置及酶切位点数目的不同,从而产生数量和长度不一的DNA酶切片段。用特异性探针对整个基因组DNA酶切片段进行杂交,即可分析限制性长度片段多态性(restriction fragment ...
...新加坡的研究人员正致力于基因研究,以便为IgA肾病提供快速和经济的检测手段。 IgA肾病是世界上最常见的炎症性肾脏疾病,尤其在东南亚发病率很高。新加坡国家肾脏病基金和国立大学联合研究工程的主要研究者Stephen Hsu博士说:“在这个...
...恶性淋巴瘤总的可分为非何杰金淋巴瘤(NHL)与何杰金氏病两大部分。NHL的免疫功能分类繁多。总体上各类型的瘤细胞的免疫细胞化学标记与相应的正常细胞标记相一致。但是由于瘤细胞的基因有变异,分化不正常,其抗原性也发生变化。因此瘤细胞比相应正常...
...此法是在亚硫酸盐催化下,生物素酰肼可置换寡核苷酸探针中胞嘧啶上的氨基,使生物素结合到DNA分子上而制成生物素化DNA探针。此法优点是采用通用试剂和技术,检出敏感。Vicied 等人指出DNA和RNA中胞嘧啶N-4位置在亚硫酸氢盐存在下可用...
...胶质细胞表面的抗原等,这些特异的标记在神经生物学和临床科研中有很大潜能,细胞表面标记能够区别活细胞,精确地研究细胞间特性和相互作用,细胞内标记能有助于对神经细胞结构、功能及相互作用的研究。Mirsky及其同事们利用半乳糖脑苷脂(GC)、硫脂...
...标记纯化的人IgG,制成免疫用的双抗原。动物免疫。动物:体重分别为2.5kg和3.0kg的雄性家兔2只。免疫:初次免疫是将含HRP20mg,IgG5mg的双抗原加等体积的福氏不完全佐剂多点、多部位注射于每只家兔的四肢。间隔1月后用原剂量的双...
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