...以质粒或噬菌体作载体进行DNA克隆，在理论上是很简捷的，即用一种限制酶切割质粒DNA，然后在体外与外源，DNA（如干扰素基因，生长激素基因）相连接，再用所得到的重组质粒转化细菌如大肠杆菌，以鉴定重组DNA。通常所用的质粒载体有pBR322...
...液体保持滤膜湿润（50μl/cm2）。溶液的组成是6×SSC，0.01mol/l EDTA, 变性的标记核酸探针，5×Denhardt液，0.5%SDS, 100μg/ml变性的鲑鱼精DNA。尽可能赶尽气泡后，将塑料袋严密封口，杂交反应在68...
...15～45min 。（11）杂交：将载片上过量的甲酰胺液倾去，加20μl杂交混合液（含放射性同位素标记的探针量为5×103～106cpm/每张载片）。覆以硅化的盖玻片，置于盛有少量5×SSC的硬塑料盒内以保持湿度，42℃孵育12～18h。为...
...分离出病毒。有报道在30例肠道病毒感染患者中，放免测定特异性抗柯萨奇B族病毒免疫球蛋白IgM阳性率为49%，而正常受试者罕见阳性。另有报道，聚合酶链反应(polymerase chain reaction;PCR)可在心包组织中检测到DNA病毒...
...离心管，加0.6倍体积的异丙醇，混匀后4℃放置15min，15000r/min离心12min，弃异丙醇，加入70%乙醇洗涤2～3次，室温干燥，加入5μlTE缓冲液（pH=8.0）溶解DNA12～24h，4℃备用。2．模板DNA的扩增采用聚合酶...
...1.DNA复制起始有哪些特点?2.原核生物与真核生物中的DNA聚合酶有哪些种类，它们各自的功能是什么?3.DNA复制时前导链与随从链的合成有哪些不同?4.DNA拓扑异构酶的作用如何?5.连接酶催化的连接反应与DNA聚合酶5′→3′聚合活性...
...通过大肠埃希菌繁殖而增殖重组质粒，也是扩增核酸的手段。但在试管中有效扩增DNA的方法，是在90年代才开展起来的多聚酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）新技术。由于PCR灵敏度高、特异性好、操作方便，在我国...
...原子吸收光谱法、离子微电极测定法、放射示踪法及标记示踪法等。目前常用标记示踪法，即用荧光探针标记靶细胞。常用的荧光探针有quin-2/Am、Fura-2/Am及Indo-1等。Fura-2/Am和Indo-1较为敏感。2.IP3的测定 采用3...
...在原核生物中，当RNA聚合酶的δ亚基发现其识别位点时，全酶就与启动子的-35区序列结合形成一个封闭的启动子复合物。由于全酶分子较大，其另一端可在到-10区的序列，在某种作用下，整个酶分子向-10序列转移并与之牢固结合，在此处发生局部DNA...
...r/ min×5min收集上清。e:如标本溶血严重经上述裂解处理后，再加等体积酚-氯仿抽提、冷乙醇沉淀DNA，加10μlDW溶解待检。2、PCR扩增（1）引物设计。以HSV DNA聚合酶的高保守区为检测靶序列以确保特异性。设计3个引物，一个...
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