采用聚合酶链反应（PCR）限制性片段长度多态性（RFLP），即PCR-RFLP技术从基因水平检测ApoE基因多态性（基因型），操作简便、快速准确。 1．仪器与试剂 （1）仪器：电泳仪、基因扩增仪； （2）试剂：Taq DNA聚合酶、dNTPs、DNA参考物（pBR322DNA/HacⅢmarkers）、HhaⅠ，其余试剂均为分析纯。 2．实验方法 （1）引物...
遗传型变异还可通过两个不同性质细菌之间发生遗传物质的转移和重组而实现.在基因转移中,提供DNA的细菌为供体,而接受DNA的细菌是受体。基因转移后获得重组的子代，即具有供体与受体菌二者的主要特性。实现基因转移需要两个基本条件：一是全部或部分供体菌的基因相应进入受体菌；二是在受体菌中形成重组（杂交）的基因组。一般在亲缘关系相近，供、受体菌间容易发生重组，而无亲缘...
建立基因库的目的是为了便于目的基因的保存、扩增和纯化。基因库是利用工具酶，通过基因重组技术和转化、筛选而建立，也是基因克隆的过程。实际上是利用低等生物如细菌、病毒、噬菌体等生长快，繁殖力强的特点，而作为一种核酸扩增筛选的载体，把 人类 等高等生物的基因或其片段用工具酶插入，重组于其中，经筛选，克隆得到目的基因与载体重组的重组基因，成为便于保存，取用方便的基因...
人类 细胞基因治疗的临床实验已经开始。进行基因治疗必须具备下列条件：①选择适当的疾病，并对其发病机理及相应基因的结构功能了解清楚；②纠正该病的基因已被克隆，并了解该基因表达与调控的机制与条件；③该基因具有适宜的受体细胞并能在体外有效表达；④具有安全有效的转移载体和方法，以及可供利用的动物模型。近三年来，已对若干人类单基因遗传病和肿瘤开展了临床的基因治疗。 1...
一、Southern印迹法 Southern印迹法在鉴定LDL-R基因缺失突变中得到了广泛的应用。采用多种限制性内切酶切，以LDL-R基因片段和外显子特异性片段作探针，进行杂交，再放射自显影，对FH进行限制性酶切图谱分析，可检测FH患者的不同外显子区域不同长度的部分缺失类型。 二、PCR法和核苷酸序列分析法 采用PCR法将包括点突变的受体基因片段扩增，再经核...
自20世纪90年代初，美国Affymetrix公司的Fodor博士提出并开始基因芯片技术以来，基因芯片技术已在医学的各领域显示出广阔的应用前景。由于其具有高通量、快速、样品用量少、高信息量等优点，世界上许多国家和地区纷纷着手进行基因芯片的研制和开发工作。我国政府对人类基因的研究也非常重视。2000年7月3日，我国首家DNA公共数据建成并投入试运行。我国也首次...
...聚合酶Ⅱ能 转录 生成mRNA，以下主要讨论RNA聚合酶Ⅱ的转录调控。 (一)顺式作用组件(cisacting elements) 真核 基因 的顺式调控组件是基因周围能与特异 转录因子 结合而影响转录的 DNA 序列。其中主要是起正性调控作用的顺式作用组件，包括 启动子 (promoter)、 增强子 (enhancer)；近年又发现起负性调控作用的组件...
（一）载体 载体（Vector）是把外源 DNA （目的 基因 ）导入 宿主 细胞 ，使之 传代 、 扩增 、表达的工具。载体有 质粒 （plasmid）、 噬菌体 、 单链 丝状噬菌体和 粘性末端 质粒（粘粒）、 病毒 等。载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的 遗传标记 ；有供外源DNA插入的 位点 ；本身体积小等特征。 质粒存在于多种 细菌 ...
...时间太长会增加非特异的复性。 3．延伸温度与时间 引物延伸 温度一般为72℃。这个温度即考虑了Taq DNA聚合酶的活性，又考虑到引物和靶 基因 的结合。不合适的延伸温度不仅会影响扩增产物的特异性，也会影响其产量，72℃时， 核苷酸 的合成速度为35-100个核苷酸/S，这取决于缓冲体系、pH、盐浓度和DNA模板的性质。72℃延伸1min对于长达2kb的扩增...
法国、比利时及美国科学家最近联合破译了促使酸奶形成的嗜热链球菌的基因序列。科学家认为，这一成果有助于研究细菌如何演变成对健康无任何损害的“良菌”。 奶制品一般在两种细菌的共同作用下发酵，最终形成酸奶。两种细菌中一种叫嗜热链球菌，一种名为保加利亚乳杆菌。它们在酸奶形成后仍然大量存活，因此肯定会被酸奶食用者吃进嘴中。 法国国家农艺研究所日前发布公告称，链球菌属的...
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