PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法,主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿...
免疫细胞化学在病理学中的应用最为广泛,并取得了很大成果。
目前用于放射免疫测定中的分离方法很多,各有其优缺点,下面介绍几种常见的分离方法: (1)吸附分离(固相颗粒) 活性碳吸附剂(目前常用) 硅镁吸附剂( 滑石粉 等) 交换树脂吸附剂 (2)蛋白沉淀剂 硫酸铵、硫酸钠 聚乙二醇(PEG)(目前常用) 无水乙醇、丙醇等 (3)免疫分离剂(第二抗体) (4)磁性分离剂 磁化活性碳吸附剂 磁化固相抗体 (5)固相包被分...
天疱疮 是一类自身免疫性疾病,其临床特点为皮肤和粘膜的自发性的、松弛性的水疱形成,病理特点是由棘层松解引起的表皮内水疱。临床上可分为寻常型(PV)、 红斑 型、落叶型(PE)、增殖型、 疱疹 样型五型。 1.免疫荧光检查应用IIF检查,天疱疮病人中85%~90%血清中有抗表皮棘细胞间抗体(Pab)存在,活动期更高。血清中Pab滴度与病情严重程度相平行。免疫荧...
胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面,由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带...
以0~4℃或-20℃低温保存,防止抗体活性降低和蛋白变性。最好加入浓度为1:5000~10000的硫柳汞或1:1000~5000的叠氮钠防腐,小量分装如0.1~1ml,真空干燥后更易长期保存。
1.如研究胃粘膜中抗体产生细胞应当掌握在HE染色时的车轮状核位于胞浆一侧,胞浆特别丰富,染色时仅胞浆着色而核不着色等特点。同时应了解所研究的抗原在组织中的大致定位及分布规律。如分泌5-羟色胺的内分泌细胞多位于固有层间质内,VIP和SP分布在固有层神经末梢及粘膜下层的神经元,胃泌素细胞分布胃肠腺体细胞之间。CEA多分布在腺癌细胞,如果在固有层内出现阳性细胞,要...
癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)是分子量约20万的糖蛋白,具有二级以上结构。不同肿瘤中提取的CEA虽然抗原性相似,但所含唾液酸及其它糖组分的含量不一定相同,故有多个抗原决定簇,能与非特异性反应抗原NCA、NCA-2和正常胎儿粪抗原等发生交叉反应。NCA存在于正常肺、胰腺、粒细胞、单核细胞及巨噬细胞内,也存在于正常肠粘膜、...
癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)是分子量约20万的糖蛋白,具有二级以上结构。不同肿瘤中提取的CEA虽然抗原性相似,但所含唾液酸及其它糖组分的含量不一定相同,故有多个抗原决定簇,能与非特异性反应抗原NCA、NCA-2和正常胎儿粪抗原等发生交叉反应。NCA存在于正常肺、胰腺、粒细胞、单核细胞及巨噬细胞内,也存在于正常肠粘膜、...
在寄生虫学中应用免疫细胞化学方法,对于人体大多数寄生虫都较其他血清学方法敏感。图象鲜明,易于观察。在诊断方面,免疫荧光间接法最常用于检查宿主的抗体。抗原制备容易,只需要作成切片、涂片或压印片标本,不需提纯可溶性抗原;有些可溶性抗原固定于醋酸纤维滤纸上,反应后以荧光计读数,可以定量。 但是,对于血中缺乏抗体的寄生虫如 皮肤利什曼病 ,则难以诊断。还有些寄生虫(...
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