1.二级结构1953年Watson 及Crick在化学分析及X光衍射法观察DNA结构的基础上提出了著名的DNA双螺旋结构模型(double helix model)此结构是在核酸一级结构基础上形成的更为复杂的高级结构,即DNA的二级结构,结构如图18-1。 图18-1 DNA的双螺旋结构 P:磷酸基;S:脱氧核糖;G:鸟嘌呤; A:腺嘌呤;T:胸腺嘧啶C:胞
在电镜技术的应用原则是二步标记法,可用于包埋前和包埋后染色。其主要区别于一般胶体金免疫染色在:①须1%卵白蛋白—PBs (pH7.4)或1%卵白蛋白—0.05mol/l Tris缓冲液(pH7.4)来封闭非特异性的结合部位,而不是采用羊或其它的动物的正常抗血清,因为PAg复合物能够与正常血清组中的Ig结合,从而给出假阳性结果;②在应用第一抗血清孵育和PBS冲
(一)树脂包埋 国内现普遍采用的是环氧树脂包埋法,可直接 脱水 后包埋,也可将小片组织或半薄切片贴在载片上,将充满环氧树脂的 明胶 囊倒置于切片上聚合、 硬化 ,进行原位包埋。 (二)低温包埋 常规树脂包埋由于需高温聚合等处理程序,组织抗原性可能全部或部分丢失。因此,在免疫电镜技术方面,国外不少实验室已开始采用低温技术如低温包埋和冰冻超薄切片等,后者需配备冰
CA125是从卵巢浆液性囊腺癌细胞株所获的抗原。分子量约500kD,表达于胚胎性体腔上皮组织。免疫细胞化学研究表明,CA125抗体能与80%以上的卵巢上皮性肿瘤起反应,但在非妇科肿瘤甚至某些正常组织,如胰腺,也能反应。血清CA125不仅在其它恶性肿瘤,如子宫癌、 乳腺癌 、肝癌、 肺癌 及 胰腺癌 等可以升高,而且在消化道、妇科的良性疾病也有升高。因此,CA
原位分子杂交技术在电镜水平的应用,或简称为电镜原位分子杂交技术是基因表达在超威结构定位的一项极有前景的新兴技术。但要使之完善,还需要做许多工作。必须说明的是电镜原位杂交技术和光镜原位杂交技术一样必须设置对照实验组,对显示的结果的解释应持审慎的态度。一般应在重复多次实验的基础上才能得出对本实验的结论,不能只凭一次实验或一张电镜照片就勿忙结论。因原位杂交技术是高
用人工制备的抗桥斑、桥糖蛋白抗体,抗细胞粘附分子、转铁蛋白、表皮生长因子、糖皮质激素等抗体,也发现了皮肤角朊细胞上有这些物质的受体存在。应用免疫组化和相关的技术,将会进一步明确它们的作用及其与皮肤病之间的关系。
RNA分子也是由核苷酸依3’,5’磷酸二酯键形成的多核苷酸链。RNA总是以单链的形式存在,也有5’磷末端及3’羟基末端。RNA单链的局部折叠成的某一片段的A及G分别与另一片段的U及C配对常形成发夹结构(hairpin structure)。在此结构内的碱基无需全部配对,而配对部位形成小的双螺旋区域,不能配对的碱基则连成小环从螺旋区中被圈出来。这种RNA单链局
1.ICC与荧光抗体法结合 首先染色显示A抗原,DAB/H2O2呈色,继之用间接(直接)荧光抗体法显示B抗原,于光镜和荧光显微镜下观察,比较两种抗原的分布。因DAB终产物能够沿其表面向周围迁移,尤其是DAB浓度略高、反应时间稍长时,形成的终产物较大,可以遮盖该抗原抗体的反应部位,故两种染色间很少出现交叉反应。该双重染色的方法主要适于显示两种抗原分布不同细胞内
从化学和生物学的意义上理解,探针是一种已知特异性的分子,它带有合适的标记物供反应后检测。探针和靶的相互反应如抗原-抗体、血凝素-碳水化合物、亲合素-生物素、受体和配体,以及核酸与其互补核酸间的杂交等反应均属此类。用核酸探针与待检标本中核酸杂交,形成杂交体,再用呈色反应显示。此方法用于疾病的诊断,称为分子杂交基因诊断。此法开始用于遗传性疾病的诊断如血红蛋白病的
变性DNA只要消除变性条件,二条互补链还可以重新结合,恢复原来的双螺旋结构,这一过程称为复性(renaturation)。通常DNA热变性后,将温度缓慢冷却,并维持在比Tm低25~30℃左右时,变性后的单链DNA即可恢复双螺旋结构,因此,这一过程又叫做退火。复性后的DNA,理化性质都能得到恢复。倘若DNA热变后快速冷却,则不能复性(图18-5)。 图18-5
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