（一）直接检出病毒核酸 1．标本滴加到硝酸纤维素膜上，病毒DNA结合到膜上，在原位进行硷变性处理后，有放射标记的已知病毒DNA片段杂并，两条单股核酸按硷基到补原则结合成双股，经放射自显影，阳性结果出现斑点状杂交信号。含轮状病毒的粪便标本经热变性处理，点到膜上，使用轮状病毒体外转录的放射标记探针做斑点杂交，敏感性高于ELISA。肠道病毒也可用互补的DNA探针做...
（1）将整封染色体铺片放置于金网上，在70%的酒精蒸汽固定4～15h，空气干燥。 （2）以强碱使DNA变性，将金网置于2×SSC内（应用0.1n NaOH调整至pH12），室温，2min。 （3） 脱水 ，以70%和95%酒精各冲洗3次，空气干燥。 （4）杂交，金网覆于平面 玻璃 皿（ Petri dish）内的杂交液滴上，每滴约10～15μl，将此小碟置于
...或UTP的类似物。在离体条件下，这种生物素化dUTP可作为大肠杆菌多聚酶I（DNA酶I）的底物掺入带有缺口的DNA或RNA，得到生物素标记的核酸探针。这种标记方法称为缺口平移法。用标记在DNA上的生物素与链霉亲合素-酶（过氧化物酶或碱性磷酸酶）标记物进行检测。 缺口平移法标记生物素DNA探针：在硅化Eppendorf管（放入冰浴中）加下列反应液： 待标记DN...
...要镁离子或锰离子作为辅助因子，当以mRNA为模板时，先合成单链DNA（ssDNA），再在反转录酶和DNA聚合酶Ⅰ作用下，以单链DNA为模板合成“发夹”型的双链DNA（dsDNA），再由核酸酶S1切成二条单链的双链DNA。因此，反转录酶可用来把任何基因的mRNA反转录成cDNA拷贝，然后可大量扩增插入载体后的cDNA。也可用来标记cDNA作为放射性的分子探针。
又称抗代谢药，是模拟正常 代谢物 质，如 叶酸 、嘌呤碱、 嘧啶 碱等的 化学 结构所合成的类似物，与有关代谢物质发生特异性的 拮抗作用 ，从而干扰 核酸 ，尤其是 DNA 的 生物合成 ，阻止瘤 细胞 的分裂繁殖。它们是 细胞周期 特异性药物，主要作用于S期。
密码子具有兼并性，如表22-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。兼并度越低，产物特异性越强，设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸，并避免引物3’末端兼并，针对兼并的混合引物已成功地用于未知靶DNA的扩增、克隆和序列分析。现已成...
用多对引物同时扩增几条DNA片段的方法称为复合PCR。这一方法最初是由Chanberlain 等检测人的基因发展而来。Bej等随之发展了对环境样品中不同属细菌相关基因序列同时PCR扩增的检测方法。两种不同的军团菌（legionella）基因，一为特异嗜肺L基因（mip），另一种为L-5SrRNA基因，通过引物摇摆（staggered）添加进行复合PCR。首先...
PCR技术以惊人的速度在研究与诊断领域得到应用，限于篇幅所限，在此不一一进行讨论了。本章 重点讨论了PCR技术发展的有关内容，尤为影响PCR的主要因素和PCR的各种反应模式及新进展，以求大家在实际工作中能够注意到这些问题，并有所创新，相信由于PCR自身高敏感性及实用性，在分子生物学研究与医学实践中PCR技术将越来越受到人们的重视。无论从哪一个角度，PCR技术...
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