...分子生物学技术质量控制对检验技术的具体要求首先是检验诊断学的质量保证,由完善、合理的实验设计来完成。⒈特异性杂交技术是通过基因克隆制备探针来完成,PCR是通过引物来完成,RFLP是利用限制内切酶来完成等。即探针、引物、限制性内切酶在反应中都具有...
...此法是先进行冷冻断裂,再做免疫标记,从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。(1)临界点干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h,PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液,可加入30%BSA后加入1%戊二醛,使BSA...
...MSP-I限制性内切酶消化正常人基因组DNA,经核酸电泳后,将DNA片段转移到一张硝酸纤维膜(或尼龙膜)上,再用32p标记的人苯丙氨酸羟化酶cDNA探针杂交后,再经放射自显影技术显示正常人群有23kb和19kb两种限制性片段长度。同时他们调查了...
...不对称PCR的基本原理是采用不等量的一对引物产生大量的单链DNA(ss-DNA)。这两种引物分别称为限制性引物与非限制性引物;其最佳比例一般为1:50~1:100,关键是限制引物的绝对量。限制性引物太多太少,均不利于制备ss-DNA。也...
...脱氧核糖核酸(DNA)进行比较。其原理是,如果患者膀胱内存在癌细胞,其尿液中的DNA将发生变化,并与血液细胞中的DNA产生差异。 雅克曼表示,这种方法简单易行,不会给患者造成过多创痛,是将来推广膀胱癌普查的一个好方法。这位专家还解释说,膀胱癌早期...
...这些多肽产生的抗血清仅同Hp反应。表达这些抗原的DNA经用32p标记显示仅能同Hp菌株杂交。用亲和纯化的尿素酶多克隆抗体的免疫印迹显示这些克隆的抗原是尿素酶分子的一部分,但并无尿素酶活性。用上述DNA探针和重组DNA表达Hp特异性抗原对探知...
...PCR扩增DNA的原理是:先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链,然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物,即左右引物。此引物范围就在包括所欲...
...小时内完成。作用把含某种多肽或蛋白的cDNA片段的质粒,按照第十九章 在光照下标记光敏生物素,然后经DNA酶消化1h,得到大量100~500bp长度的混合片段,变性后用于原位杂交。如为培养细胞或细胞涂片,用95%乙醇、5%乙醇固定5min,...
...在各种自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)等病人血清中常可检出抗脱氧核糖核酸(DNA)抗体,其中抗单链DNA(ssDNA)抗体可见于各种自身免疫病和结缔组织病人血液中,故无多大诊断特异性。但抗双链DNA(dsDNA)抗体主要见于...
...用免疫斑点法或免疫细胞化学染色等方法可鉴定抗体的标记效果1.免疫斑点法 在处理好的硝酸纤维素膜上分别滴加100~10-7系列稀释的抗原,斑点直径0.25cm, 空气中干燥,80℃多聚甲醛蒸气固定1h,然后分别以胶体铁标记的抗体一步法或用桥...
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