原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外，又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。现分别予以介绍。
为了体外研究脂蛋白的细胞代谢和脂蛋白受体活性，早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纤维细胞 125 I标记LDL的配体-受体结合分析法。其基本原理是：用放射性同位素（常用 125 I）标记LDL后，与细胞（通常为培养的单层成纤维细胞）、组织或含有LDL-R的制剂一起孵育，使LDL-R与 125 I-LDL充分结合，形成受体-配体复合物，再除...
...经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理水（蒸馏水等）中，经猛烈振摇后，于室温静止数小时，然后高压灭菌，以除去降解DEPC（DEPC分解为CO 2...
胶体金标记蛋白质的原理，一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时，蛋白质呈电中性，此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小，但蛋白质分子的表面张力却最大，处于一种微弱的水化状态，较易吸附于金颗粒的表面，由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，而使胶体金处于稳定状态，如果＝低于蛋白质的等电点时，蛋白质带...
为了探讨供者用维生素E酯(VES)预处理对原位小 鼠脂 肪肝移植的保护作用及其机理，建立了小鼠原位肝移植模型，随机分为正常小鼠对照组(n=8)、 肥胖 小鼠对照组(n=8)、非 脂肪肝 移植组(n=12)、脂肪肝移植组(n=12)、VES预处理脂肪肝移植组(n=12)。术后检测各组血清丙氨酸转氨酶(ALT)、 天冬 氨酸转氨酶(AST)相对水平;肝脏组织HE...
凝集素的特性及标记原理详见第五章 ，近年来，凝集素电镜标记技术应用日益广泛，且获得较为满意的效果。凝集素电镜标记技术方法较多，常用的有凝集素—酶（常用为HRP）、凝集素—生物素—酶电镜标记技术。现将凝集素—酶电镜标记技术（包埋前染色）简介如下（Sterit 和Kreatzberg,1987）。 （1）固定：常用为PLP或多聚甲醛—戊二醛固定液。如为取脑组织，...
...7.4缓冲液，22℃，25min，同上过Sephadex G-50，收集蛋白A峰。 （3）取0.77mg/ml的PE和0.27mg/ml蛋白A等量混合，22℃反应6h，混合物4℃保存备用。 以上两种PE标记制品，可最后溶于0.01mol/l pH7.4PB(含有0.1mol/l DETA、1mol/L碘乙酰胺、1%BSA 和0.1%NaN3),0～5℃保存。
原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外，又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。现分别予以介绍。
...至48μl，加DNA聚合酶（SABC）8u，混匀，37 ℃ ，2h，加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl，终止反应。 在随机引物标记体系中，加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%)，发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。Bio-11-Dutp/dTTP（%）比值为35%时，其标记率最高，显色灵敏度达0.2pg，杂交灵敏度...
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下： （1）根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。 （2）在电磁搅拌下，将蛋白质溶液加入胶体金溶液中（pH已调至PI超过0.5pH），加入蛋白质时应逐滴加入，1mg的蛋白质大约5min加完。 （3）在磁性搅拌下加入5%的 牛血 清白蛋白（BSA）使其终浓度为1%，或...
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