...(1,1'-dioctadecy1-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI)标记LDL,原理与同位素标记LDL相同。其操作步骤见图20-1。直接荧光法可定量检测附着的或非...
...ml),混合均匀,60℃反应1h。④加入1130μl 的乙醇,-20℃沉淀1~2h。⑤ 离心收集DNA沉淀。⑥用70%乙醇洗两次,最后将沉淀悬浮于少量10mmol/L Tris-HCl,1mmol/l EDTA中。置4℃备用。2.由冰冻组织...
...遗传信息这一错误认识,确立了核酸是遗传物质的重要地位;DNA遗传作用的进一步肯定来自Alfred Hershey和Martha Chase对一个感染大肠杆菌的病毒的研究。即用放谢性同位素32P标记噬菌体DNA,35S标记其蛋白质外壳,再用标记的...
...是含薄荷或有薄荷或柑橘味的除臭剂)、治疗脂溢性皮炎和湿疹的煤焦油,以及植物如牧草和欧芹中的某些物质。某些疾病如系统性红斑狼疮和卟啉症等也可引起光敏反应。某些光敏反应(如多形性日光疹)似乎与疾病或药物无关。有些人即使暴露在日光下很短时间,也会...
...棕色。2.SPA用于PAP法的操作步骤(1)切片脱蜡至水洗。(2)80%甲醇(含0.6%H2O2)封闭内源酶活性5min。(3)10%卵白蛋白Tris缓冲液,20min。(4)第一抗体作用37℃,30min或4℃ ,16~48h。(5)...
...RNA探针比cDNA探针的敏感性提高10倍以上,在许多优点。它们是单链,不需变性,也没有互补链的干扰,与靶基因杂交比DNA探针更稳定。Bio-11-dUTP可通过Sp6、T3和T7RNA聚合酶掺入到RNA转录子中。标记方法:其下列反应体积...
...300~500bp时,包埋组织DNA杂交信号强度只有相同量标准DNA的10%~85%。信号强度与原始DNA大小呈正相关,最小片段DNA产生最弱的信号。(2)包埋组织DNA所致的非特异性背景杂交比标准DNA为明显。这种背景杂交的产生可能是由于不...
...DNA的复性速率,并可建立序列复杂度与动力学复杂度间的关系。60年代中期Nygaard 等的研究为应用标记DNA或RNA探针检测固定在硝酸纤维素(NC)膜上的DNA序列奠定了基础。如Brown等应用这一技术评估了爪蟾rRNA基因的拷贝数。...
...’→3外切酶活性,也不能用单链DNA作为模板。2.噬菌体DNA聚合酶这里以T4DNA聚合酶为例。它也具有5’→3聚合酶活性,但它的外切酶活性比大肠杆菌的要高200倍。因此,它也可用来补齐单链末端或标记同位素。(二)RNA聚合酶RNA聚合酶(...
...nmol/L TAPS(三羟基-甲基-氨基丙烷磺酸钠pH9.3,25℃),50mmol/l KCl, 2mmol/L MgCl2,1mmol/L β-ME(巯基乙醇),dATP、dTTP、dGTP各200mmol/L,dCTP为100...
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