1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。 2．蛋白水解酶 类 贮存液 贮存温度 反应浓度 反应缓冲液 温度 预处理 0.01mol/L Tris(pH7.8) 链霉蛋白酶 a 20mg/ml -20℃（溶于水） 1mg/ml 0.01mol/L EDTA 37℃ 自消化 b 0.5% SDS ...
1．如研究胃粘膜中抗体产生细胞应当掌握在HE染色时的车轮状核位于胞浆一侧，胞浆特别丰富，染色时仅胞浆着色而核不着色等特点。同时应了解所研究的抗原在组织中的大致定位及分布规律。如分泌5-羟色胺的内分泌细胞多位于固有层间质内，VIP和SP分布在固有层神经末梢及粘膜下层的神经元，胃泌素细胞分布胃肠腺体细胞之间。CEA多分布在腺癌细胞，如果在固有层内出现阳性细胞，要...
利用寡核苷酸自动合成仪，可很简单地合成制备寡核苷酸探针（如15～50bp），这类探针具有以下优点：①短的探针比长探针杂交速度快，特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链探针，避免了用双链DNA探针在杂交中自我复性，提高杂交效率。⑤寡核苷酸探针可以检测小DNA片段，在严格的杂交条件下，可用于检测在序列中单碱基对的错配。 因此...
肾穿刺组织一般应切割为三小块，分别作冰冻切片、石蜡切片及超薄切片，进行荧光显微镜、光学显微镜及透射电镜观察。所应用的免疫细胞化学技术包括免疫荧光、免疫酶标及免疫电镜，兹分述如下： （一）免疫荧光细胞化学技术的应用 自1938年超高压汞灯荧光显微镜问世后，Coon于1942年首先应用荧光素标记抗体检查 肺炎 球菌，为荧光抗体技术的发展奠定了基础。1961年Di...
在获得特异的目的基因后，可用以下方法大量扩增制备：①用体外DNA重组技术与载体DNA相连，转化至大肠杆菌中进行无性繁殖。以氯化铯超速离心纯化重组质粒DNA，并以合适限制性内切酶消化，经凝胶电泳制备回收特异的目的核酸片段。②聚合酶链式反应（Poly－merase chain reaction, PCR）扩增技术：利用这种先进技术能简便快速制备大量特异性目的核酸...
癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）是分子量约20万的糖蛋白，具有二级以上结构。不同肿瘤中提取的CEA虽然抗原性相似，但所含唾液酸及其它糖组分的含量不一定相同，故有多个抗原决定簇，能与非特异性反应抗原NCA、NCA-2和正常胎儿粪抗原等发生交叉反应。NCA存在于正常肺、胰腺、粒细胞、单核细胞及巨噬细胞内，也存在于正常肠粘膜、...
癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）是分子量约20万的糖蛋白，具有二级以上结构。不同肿瘤中提取的CEA虽然抗原性相似，但所含唾液酸及其它糖组分的含量不一定相同，故有多个抗原决定簇，能与非特异性反应抗原NCA、NCA-2和正常胎儿粪抗原等发生交叉反应。NCA存在于正常肺、胰腺、粒细胞、单核细胞及巨噬细胞内，也存在于正常肠粘膜、...
核酸分子的固相杂交是将待测核酸样品结合在某种固相支持物上，然后与溶液中的标记探针进行杂交。目前使用最多的固相支持物是硝酸纤维膜。这里重点介绍直接点样技术，转移技术及其它常用的杂交技术。 （一）斑点杂交的直接点样法 斑点杂交或叫打点杂交（dot-blot hybridization），其主要特点是事先不用限制内切酶消化或用凝胶电泳分离核酸样品，操作简便，灵敏度...
在寄生虫学中应用免疫细胞化学方法，对于人体大多数寄生虫都较其他血清学方法敏感。图象鲜明，易于观察。在诊断方面，免疫荧光间接法最常用于检查宿主的抗体。抗原制备容易，只需要作成切片、涂片或压印片标本，不需提纯可溶性抗原；有些可溶性抗原固定于醋酸纤维滤纸上，反应后以荧光计读数，可以定量。 但是，对于血中缺乏抗体的寄生虫如 皮肤利什曼病 ，则难以诊断。还有些寄生虫（...
虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针，但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同，所不同的是：（1）杂交时需先在高温80～95℃短时处理，使DNA探针及细胞内靶DNA变性，解离成单链，迅置于冰上冷却。然后置于37℃～42℃杂交过夜。（2）RNA酶的溶液的冲洗不能减低背景，因此，在操作步骤...
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