...进行。2.省时应用TaqDNA聚合酶时,单核苷酸掺入速率较高,75~80℃时,每个酶分子每秒钟可完成150个核苷酸的合成。PCR每一周期需数分钟,所以,一般常取用20~30个周期能使目的DNA达数到百万倍扩增的反应只要数小时即可完成。在基因...
...蔡文琴,等.用光敏生物素反意生长抑素(SS)cRNA探针显示组织切片中ss mRNA。解剖学杂志,1992,15(4):312~31313.正向华,张俐.应用反意生长抑素cRNA探针原位杂交显示大鼠下丘脑生长抑素mRNA.解剖学杂志,...
...蔡文琴,等.用光敏生物素反意生长抑素(SS)cRNA探针显示组织切片中ss mRNA。解剖学杂志,1992,15(4):312~31313.正向华,张俐.应用反意生长抑素cRNA探针原位杂交显示大鼠下丘脑生长抑素mRNA.解剖学杂志,...
...易取,操作简便、快捷等优点。方法学有液相分子杂交和原位杂交等,尤其对检测极微量病原体DNA片段,可应用聚合酶链反应(PCR),使其扩增几十万倍,使之易于检出。本章所叙述的几种传染病几乎全部可以用分子探针进行病原鉴定。...
...易取,操作简便、快捷等优点。方法学有液相分子杂交和原位杂交等,尤其对检测极微量病原体DNA片段,可应用聚合酶链反应(PCR),使其扩增几十万倍,使之易于检出。本章所叙述的几种传染病几乎全部可以用分子探针进行病原鉴定。...
...一、DNA变性DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂,双螺旋解开,形成单链无规则线团,因而发生性质改变(如粘度下降,沉降速度增加,浮力上升,紫外吸收增加等),称为DNA变性。加热、改变DNA溶液的pH、或受有机溶剂(如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺...
...分子生物学中应用最广的限制性内切酶。通常在重组DNA技术提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言。表20-1 DNA重组技术中最常用的工具酶酶主要用途限制性核酸内切酶识别DNA特定序列,切断DNA链DNA聚合酶Ⅰ或其大片段(Klenow)①缺口平移...
...病原体遗传物质来确认病原体也许是检查病原体为直接的方法了。目前比较成熟的技术包括基因探针技术和PCR技术。(一)基因探针技术用标记物标记细菌染色体或质粒DNA上的特异性片段制备成细菌探针,待检标本经过短时间培养后,经过点膜、裂解变性、预杂交和...
...凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时,可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。按照标准方法制32p ATP标记的寡核苷酸探针,需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×...
...分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测,必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记,这条链就称为核酸探针。因此,核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的...
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