...这些多肽产生的抗血清仅同Hp反应。表达这些抗原的DNA经用32p标记显示仅能同Hp菌株杂交。用亲和纯化的尿素酶多克隆抗体的免疫印迹显示这些克隆的抗原是尿素酶分子的一部分,但并无尿素酶活性。用上述DNA探针和重组DNA表达Hp特异性抗原对探知...
...小时内完成。作用把含某种多肽或蛋白的cDNA片段的质粒,按照第十九章 在光照下标记光敏生物素,然后经DNA酶消化1h,得到大量100~500bp长度的混合片段,变性后用于原位杂交。如为培养细胞或细胞涂片,用95%乙醇、5%乙醇固定5min,...
...作2倍系列稀释,取5μl点膜,封闭后显色。结果探针经32倍稀释(最高稀释度5ng)后仍呈现明显的显色反应,证实探针的标记以及显色效应良好。c.DNA斑点杂交:提取的DNA或其PCR扩增产物0.5mol/l NaOH变性20min,取5μl点...
...片段转移至尼龙膜上;④经变性处理后用同位素标记的探针进行分子杂交。经放射自显影,得到显影带(bands)。即可得知分子量大小不同的DNA片段(图20-9)。图20-9用RFLP进行组织定型比较三个标本的组织定型RFLP组织配型实验是用于血清学...
...TaqDNA聚合酶,dNTP,DNA参考物,Sca-1酶。二、操作方法1.模DNA提取取用EDTA抗凝全血100μl加试剂(0.32mol/L蔗糖,5mmol/l MgCl2,1%TritonX-100,0.01mol/L Tris-HClpH...
...TaqDNA聚合酶,dNTP,DNA参考物,Sca-1酶。二、操作方法1.模DNA提取取用EDTA抗凝全血100μl加试剂(0.32mol/L蔗糖,5mmol/l MgCl2,1%TritonX-100,0.01mol/L Tris-HClpH...
...situhybridizationImmunocytochemistry)作为组织探针,在发现神经系统特有的蛋白质和肽类方面。具有更高的特异性和灵敏性。重组DNA工程系列用制备的脑的多聚腺苷酸的mRNA,反转录为互补DNa (cDNA),克隆后与组织切片中的mRNA杂交,再按其...
...模板。各自合成一条新的DNA链。由于DNA一条链的走向是5′→3′方向,另一条链的走向是3′→5′方向,但生物体内DNA聚合酶只能催化DNA从5′→3′的方向合成。那么,两条方向不同的链怎样才能做模板呢?这个问题由日本学者岗崎先生解决。原来,...
...-5-10-6,复制过程中如有错误的核苷酸参入,DNA聚合酶还会暂停催化作用,以其3′-5′外切核酸酶的活性切除错误接上的核苷酸,然后再继续正确的复制,这种校正作用广泛存在于原核和真核的DNA聚合酶中,可以说是对DNA复制错误的修复形式,...
...在DNA的一级结构中,四种碱基A,T,C,G远非均匀分布,尽管双螺旋的构型大体相同,但沿着DNA链各处的物理结构不完全相同,各处双螺旋的稳定性也就显示出差别,充分体现了DNA一级结构决定高级结构的原理。其不均一性主要有:1.反向重复序列(...
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