...Kbaffan等(1986)首先创立了蓝色荧光素标记和染色技术,可进行双标记或多标记。(1)取7-氨基-4-甲基香豆素(7-amino-4-methyl coumarin, AMC)260μg溶于二甲亚砜25μl中。(2)将上液加入10...
...液10μl于切片上,盖上22×22mm的硅化盖片或相当大小看蜡膜,3H标记探针每10μl杂交液含1×105cpm探针,32P或35S标记探针每10μl杂交液含5×105cpm探针;如是漂浮切片,则用灭菌吸水纸将切片水份尽量吸干,然后入杂交液...
...在这方面的要求是即要保存良好的细胞超威结构,又要注意保持组织的抗原性。因此,选用固定剂不宜过强。常用的免疫电镜固定剂有多聚甲醛—戊二醛混合液和过碘酸-赖氨酸—多聚甲醛液(Periodate—Lysine –Paraformaldehyde...
...此法标记原理如下图所示:标记的HRP部分催化底物化学发光反应:氨基苯二甲酰肼氨基苯二甲酸+N2+光→X-光片上感光10~20min显定影。光亮子在酚、萘及胺类等增强剂促进下,而使光亮增强。这种方法就是利用特殊的酶底物,氧化后把产生的能量...
...抗体产生细胞胞浆内含有相对多的抗原,故采用直接或间接法免疫细胞化学技术可简化步骤,节 省时间,降低成本。为了清除组织间弥散的免疫球蛋白,我们在固定前用PBS浸洗,取得良好的效果。用双标记免疫荧光技术可以在同一张切片上显示出两种不同的抗体...
...1.HRP标记凝集素法 适用于小量的凝集素标记(Ponder 1983)。(1)HRP的活化①将10mg HRP(SigmaType VI)溶解在1ml 0.3mol/L 的重碳酸钠溶液中(1.25g/50ml)。②加50μl含1%氟...
...1.基本原理首先用酶免疫动物,制备效价高、特异性强的抗酶抗体,然后使用第二抗体作桥,将抗酶抗体连结在与组织抗原结合的第一抗体上,再将酶结合在抗酶抗体,经呈色显示抗原的分布。在此过程中,任何抗体均未被酶标记,酶是通过免疫学原理与抗酶抗体结合...
...聚合酶链反应(PCR)或称体外基因倍增技术,它利用一对位于待扩增的DNA序列两端的取向相对的DNA引物,在DNA聚合酶的介导下,经过多次变性,退火和延伸过程的重复性循环,大量合成靶DNA序列。在标记dNTP存在时,经PCR反应产生的靶...
...原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外,又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。现分别予以介绍。...
...其中UCHL-1已被广泛采用。新近又推出A6,MCA6,比UCHL-1效果要好。OPD4可用于石蜡切片TH标记。CD5,CD6等McAb特异性不足,可以标记少数B淋巴细胞,粒细胞等。表12-3 介绍了T淋巴细胞分布及各阶段细胞的部位、免疫表型...
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