...:①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。④容易从宿主细胞中...
...目的DNA片段可直接用作序列分析,较常用的通过克隆、培养扩增、纯化制备等步骤获得测序片段更为简便。3.灵敏度高PCR产物的生成是以指数方式增加的,所以欲扩增pg量级的起始物到μg水平或放大真核细胞单拷贝基因,通过PCR方法都是不难完成的。...
...多态性(SNP)可导致COL1A1基因形成“s”形,从而影响与Sp1蛋白的结合。他们在对早期研究进行meta分析时发现,s等位基因纯合子(ss)个体的骨密度非常低,而没有SNP(SS)个体的骨密度则比较高。杂合子(Ss)个体的骨密度则为中等。...
...解离,从而产生游离的5’端标记8核苷酸单链。不被切开的βS杂交体尚可被另一个限制酶Hinf I消化,该酶的识别位点紧靠Del I 识别位点上游。βS杂交DNA经Hinf I消化后,将释出探针DNA的5’末端3核苷酸小片段。βADNA杂交体因...
...分离的双链DNA片段均可进行此法标记,全质粒标记敏感性较高,因为标记物可同时掺入载体DNA。此法也可用于放射性同位素和地辛标记DNA法。...
...杂交或扩增片段长度多态性 (AFLP) 检测方法可对脆性 X 综合征作出准确的基因诊断和产前基因诊断。 FMR1 基因编码蛋白的特异性抗体检测 FMRP 蛋白,也是脆性 X 综合征诊断的常用方法。...
...的化合物有相似的图谱,专属性差。故紫外光谱法较少应用于指纹图谱的构建中。1.7分子生物学方法不同生物体有各自相对稳定的DNA序列,因而可以利用现代分子生物学技术构建DNA指纹图谱。限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)技术和随机扩增多态...
...成正比。DNA分子在凝胶中泳动速度决定于电荷效应及分子效应。前者由所带净电荷量决定,而后者与分子大小及构型有关。按照DNA分子大小,其凝胶浓度可做不同的调整。有条件的实验室也可用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析扩增的DNA片段。表22-2 ...
...含重组质粒的细胞菌落常用的鉴定方法有:①小规模制备质粒DNA进行限制酶切分析;②α互补;③插入失活;④杂交筛选。下面简要介绍小规模制备质粒DNA进行限制性酶切分析。小规模制备质粒DNA可用天美等公司的Wizard Minipreps ...
...反应在0.5ml管内进行,反应体积为50μl,内含50mmol/l Tris(pH7.5)、10mmol/l Mg-Cl2、10mmol/L β-巯基乙醇和500μg BSA/ml,引物片段1和2各90ng,模板DNA0.1μg,[α-...
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