...本法反应温和,对抗原、抗体免疫活性影响小,已被广泛应用。缺点是标记率较低,一般为20~40%。1.原理此法是利用乳过氧化物酶(Lactoperoxidase)有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用,生成125I+,并标记在多肽、蛋白质...
...标记过多或过少荧光素的抗体分子可用DEAE-纤维素柱层析法除去。方法如下:DEAE-纤维素柱的装柱,洗脱、再生方法等与提纯IgG方法相同。装柱所需DEAE-纤维素量以干重每克交换20~50mg标记蛋白量为宜。常用梯度洗脱法如下:(1)...
...hybridization)就是分子杂交技术在基因定位中的应用,也是一种直接进行基因定位的方法。分子杂交的基本原理是碱基的互补配对,同源的DNA-DNA双链或DNA-RNA链在一定条件下能结合成双链,用放射性或非放射性物质标记的DNA或RNA分子作为探针...
...hybridization)就是分子杂交技术在基因定位中的应用,也是一种直接进行基因定位的方法。分子杂交的基本原理是碱基的互补配对,同源的DNA-DNA双链或DNA-RNA链在一定条件下能结合成双链,用放射性或非放射性物质标记的DNA或RNA分子作为探针...
...免疫细胞化学技术中可作为桥抗体或标记抗体。由于SPA能与多种动物的IgG的Fc段结合,因此,作为第二抗体或标记抗体,SPA的最大优点是不受种属特异性的限制,故在目前各种免疫细胞化学技术中已得到广泛的应用。除不受种属限制这一特点外,SPA法还...
...15~45min 。(11)杂交:将载片上过量的甲酰胺液倾去,加20μl杂交混合液(含放射性同位素标记的探针量为5×103~106cpm/每张载片)。覆以硅化的盖玻片,置于盛有少量5×SSC的硬塑料盒内以保持湿度,42℃孵育12~18h。为...
...探针及细胞内靶DNA变性,解离成单链,迅置于冰上冷却。然后置于37℃~42℃杂交过夜。(2)RNA酶的溶液的冲洗不能减低背景,因此,在操作步骤中省略此步。(一)地高辛-碱性磷酸酶(Dig -AKP)标记DNA探针在石蜡包埋切片检测病毒DNA...
...粘粒)、病毒等。载体具有能自我复制;有可选择的,便于筛选、鉴定的遗传标记;有供外源DNA插入的位点;本身体积小等特征。质粒存在于多种细菌,是染色体(核)以外的独立遗传因子,由双链环状DNA组成,几乎完全裸露,很少有蛋白质结合。质粒有严紧型和...
...放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)是以放射性核素为标记物的标记免疫分析法,用于定量测定受检标本中的抗原。最初建立的方法模式是以核素标记的抗原与受检标本中抗原竞争的测定模式,为区别于前者,称为免疫放射分析(...
...某些抗原可以用荧光素标记,制成荧光抗原,标记荧光素的方法与制备荧光抗体方法相同。用荧光抗原可以直接检查细胞或组织内的相应抗体,特异性较好,敏感性较差。染色方法同荧光抗体染色的直接法。由于多数抗原难以提纯或量少不昂贵,一般很少采用此法。...
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