以ApoB基因第26个外显子MspⅠ RFLP为例，具体介绍检测的方法和步骤，笔者对湖北地区健康成人（120例）进行了检测。 （一）材料 引物（如前所述），TaqDNA聚合酶、dNTP、限制性内切酶MspⅠ、高速离心机、基因扩增仪、恒温水浴箱、电泳系统、紫外监测仪。 （二）方法 1.模板DNA的提取 可采用改良的TritonX-100法提取人白细胞DNA，此...
...个内含子和四个外显子。目前对载脂蛋白CⅢ基因3'末端非编码区C-G对换产生一个Sac-Ⅰ酶切位点与 冠心病 的关系未有定论。用多聚酶链反应（PCR）扩增载脂蛋白CⅢ基因3'末端233bp，再用Sac-1酶切扩增产物，可以检测载脂蛋白CⅢ基因3'末端的突变及其与 动脉粥样硬化 相关性。本节采用PCR-RFLP检测ApoCⅢ基因型。 一、仪器与试剂 1．仪器：电...
...直接ELISA反应检测O157∶H7大肠埃希杆菌。 3. 基因检测 应用EHEC特异性 DNA 探针 ，其敏感性、特异性均可达99%;或应用PCR对EHEC DNA序列分析，发现其 溶血素 AB 基因 为EHEC特有，其特异性强，敏感快速，3～4h可出结果。其他尚有对SLT1、SLT2两对 寡核苷酸 引物 同时 扩增 的多重PCR法，但尚未在临床广泛应用。基...
...直接ELISA反应检测O157∶H7大肠埃希杆菌。 3. 基因检测 应用EHEC特异性 DNA 探针 ，其敏感性、特异性均可达99%;或应用PCR对EHEC DNA序列分析，发现其 溶血素 AB 基因 为EHEC特有，其特异性强，敏感快速，3～4h可出结果。其他尚有对SLT1、SLT2两对 寡核苷酸 引物 同时 扩增 的多重PCR法，但尚未在临床广泛应用。基...
...个内含子和四个外显子。目前对载脂蛋白CⅢ基因3'末端非编码区C-G对换产生一个Sac-Ⅰ酶切位点与 冠心病 的关系未有定论。用多聚酶链反应（PCR）扩增载脂蛋白CⅢ基因3'末端233bp，再用Sac-1酶切扩增产物，可以检测载脂蛋白CⅢ基因3'末端的突变及其与 动脉粥样硬化 相关性。本节采用PCR-RFLP检测ApoCⅢ基因型。 一、仪器与试剂 1．仪器：电...
...个内含子和四个外显子。目前对载脂蛋白CⅢ基因3'末端非编码区C-G对换产生一个Sac-Ⅰ酶切位点与 冠心病 的关系未有定论。用多聚酶链反应（PCR）扩增载脂蛋白CⅢ基因3'末端233bp，再用Sac-1酶切扩增产物，可以检测载脂蛋白CⅢ基因3'末端的突变及其与 动脉粥样硬化 相关性。本节采用PCR-RFLP检测ApoCⅢ基因型。 一、仪器与试剂 1．仪器：电...
...个内含子和四个外显子。目前对载脂蛋白CⅢ基因3'末端非编码区C-G对换产生一个Sac-Ⅰ酶切位点与 冠心病 的关系未有定论。用多聚酶链反应（PCR）扩增载脂蛋白CⅢ基因3'末端233bp，再用Sac-1酶切扩增产物，可以检测载脂蛋白CⅢ基因3'末端的突变及其与 动脉粥样硬化 相关性。本节采用PCR-RFLP检测ApoCⅢ基因型。 一、仪器与试剂 1．仪器：电...
...过程，即所谓 疣状癌 。 五、 基因诊断 迄今，HPV难于用传统的 病毒培养 及血清学技术检测，主要实验诊断技术是 核酸 杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径。 （一） 标本 的采集及处理 1．标本的采集和 预处理 ：用刮板或 生理盐水 浸润的棉棒从 阴道 和宫颈外口取分泌物和细胞。在作 细胞学 检查的同时，...
...方法。 三、检测细菌遗传物质 通过检测 病原体 遗传物质来确认病原体也许是检查病原体为直接的方法了。目前比较成熟的技术包括 基因探针 技术和PCR技术。 （一）基因探针技术 用 标记物 标记细菌 染色体 或 质粒 DNA 上的特异性片段制备成细菌 探针 ，待检标本经过短时间培养后，经过点膜、裂解变性、预杂交和杂交后，利用探针上标记物发出的信号可以知道杂交结果...
最常用的同位素是α- 32 PdNTP, 3 HdNTP,及 35 SdNTP，多用缺品平移法、末端标记法，随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时，同时掺入标记的脱氧核苷酸，制出cD－NA标记探针。
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