虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针，但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同，所不同的是：（1）杂交时需先在高温80～95℃短时处理，使DNA探针及细胞内靶DNA变性，解离成单链，迅置于冰上冷却。然后置于37℃～42℃杂交过夜。（2）RNA酶的溶液的冲洗不能减低背景，因此，在操作步骤...
DNA 在复制过程中，合成出的 前导链 为一条连续的长链。随从链则是由合成出许多相邻的片段，在 连接酶 的 催化 下，连接成为一条长链。连接作用是在连接酶催化下进行的。 连接酶(ligase)的作用是催化相邻的DNA片段以3′、5′－ 磷酸二酯键 相连接。连接反应中的能量来自 ATP (或NAD＋)。连接酶先与ATP作用，以 共价键 相连生成E桝MP中间体。...
这是最早用于性病诊断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记，以利于杂交信号的检测。 所谓杂交（hydridization）指两个以上的分子因具有相近的...
(一) DNA 复制的起始点 很多实验都证明：复制是从DNA 分子 上的特定部位开始的，这一部位叫做复制起始点(originof replication)常用ori或o表示。 细胞 中的DNA复制一经开始就会连续复制下去，直至完成细胞中全部 基因组 DNA的复制。DNA复制从起始点开始直到终点为止，每个这样的DNA单位称为 复制子 或复制单元(replico...
自Gall和Pardue建立了原位杂交技术以来近20余年内，这一技术为基因的定位和表达、基因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病毒学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供了极其宝贵的资料，发挥了其它技术难以取代的作用。近年来，此一技术的应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度（详见二十二章 ），另一方面是提高...
图16－9 DNA聚合酶的作用 1957年，Arthur kornberg首次在大肠杆菌中发现DNA聚合酶Ⅰ，(DNa polymerase Ⅰ,简写DNA polⅠ)后来又相继发现了DNA聚合酶Ⅱ和DNA聚合酶Ⅲ。(DNa polymerase Ⅱ，Ⅲ，简写DNA polⅡ,DNA polⅢ)实验证明大肠杆菌中DNA复制的主要过程靠DNa polⅢ起作用，...
环境和生物体内的因素都经常会使 DNA 的结构发生改变。DNA的复制会发生 碱基 的配对错误；体内DNA会有自发性结构变化，包括DNA链上的碱基异构互变、 脱氨 基、碱基修饰、DNA链上的碱基脱落等。外界 射线 的照射等 物理因素 ， 烷化剂 、碱基类似物、修饰剂等 化学 因素都能损伤DNA的结构，变化包括有相邻 嘧啶 共价 二聚体 的形成、碱基、脱氧核糖和...
Watson和Crick在提出DNA双螺旋结构模型时即推测，DNA在复制时首先两条链之间的氢键断裂两条链分开，然后以每一条链分别做模板各自合成一条新的DNA链，这样新合成的子代DNA分子中一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式为半保留复制。 1958年Meselson和Stahl利用氮标记技术在大肠杆菌中首次证实了DNA的半保留复制，他们将大...
DNA存储着生物体赖以生存和繁衍的遗传信息，因此维护DNA分子的完整性对细胞至关重要。外界环境和生物体内部的因素都经常会导致DNA分子的损伤或改变，而且与RNA及蛋白质可以在胞内大量合成不同，一般在一个原核细胞中只有一份DNA，在真核二倍体细胞中相同的DNA也只有一对，如果DNA的损伤或遗传信息的改变不能更正，对体细胞就可能影响其功能或生存，对生殖细胞则可能...
自Gall和Pardue建立了原位杂交技术以来近20余年内，这一技术为基因的定位和表达、基因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病毒学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供了极其宝贵的资料，发挥了其它技术难以取代的作用。近年来，此一技术的应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度（详见二十二章 ），另一方面是提高...
所有搜索结果仅供参考，如需解决具体问题请咨询相关领域专业人士。