...利用寡核苷酸自动合成仪,可很简单地合成制备寡核苷酸探针(如15~50bp),这类探针具有以下优点:①短的探针比长探针杂交速度快,特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链探针,避免了用双链DNA探针在杂交...
...引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中,制成标记探针,敏感度高于化学修饰法,但操作程序复杂,产量低,成本高。化学修饰法是将不同标记物用化学方法连接到DNA分子上,方法简单,成本低,适用于大量制备(>50μ...
...加DNA聚合酶(SABC)8u,混匀,37℃,2h,加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl,终止反应。在随机引物标记体系中,加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%),发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。...
...短的重复顺序分别长16、17、32、33、37、41、62、64和376bp,但这些重复顺序几乎都共有一种“核心顺序”。“核心顺序”长10~15bp。如果人工合成很短的重复顺序作为DNA分子杂交的探针,同经限制性内切酶酶切的人体DNA作...
...梅毒的核酸探针 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。 分子杂交法:阴性 阳性:梅毒感染。...
...100万个片段,多的可达1000万个片段。如果其中有一、二个片段发生改变,不可能从电泳凝胶上直接观察分辨。此时就必定要用合适的探针。某个目的基因或某一特定的DNA片段,在同酶切后的DNA作分子杂交后,可在曝光的X线片上看到RFLP。图23-...
...repetitive sequence),所得到的Cot曲线更为复杂。图15-9 不同物种核酸的Cot曲线DNA的变性和复性原理,现已在医学和生命科学上得到广泛的应用。如核酸杂交与探针技术,聚合酶链反应(polymerasechain ...
...标记技术有:缺口平移;DNA快速末端标记;用T4多核苷酸酶标记DNa5'末端,随引物延伸;聚合酶链反应。核酸探针的非放射性标记技术有:光促生物素标记核酸、酶促生物素标记核酸、寡核苷酸的生物素末端标记、酶标DNA、酶标寡核苷酸、DNA半抗原标记。...
...短的重复顺序分别长16、17、32、33、37、41、62、64和376bp,但这些重复顺序几乎都共有一种“核心顺序”。“核心顺序”长10~15bp。如果人工合成很短的重复顺序作为DNA分子杂交的探针,同经限制性内切酶酶切的人体DNA作...
...寡核苷酸探针的优点在于它能根据需要人工用DNA合成仪合成,其长度及分子大小比较一致,可以控制。其长度一般较克隆的DNA片段短。目前,寡核苷酸探针已能成功的为放射性同位素、荧光素、生物素和地高辛所标记,并成功地运用于培养细胞、组织切片和...
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