...mg/ml)的提取缓冲液加温孵育,然后进行苯酚和氯仿抽提。所得DNA虽不完整,但可被限制性内切酶切割,因而适于点杂交,印迹杂交等多种分子生物学实验。Dubeau等(1986)在上述方法上作了改进。首先通过组织切片用二甲苯脱蜡,保证了组织的完全...
...经2%琼脂糖电泳,紫外灯下呈一条强荧光带,与已知DNa Marker相比较,约位于480bp的位置,与设计相符。扩增产物经MspⅠ酶切后,在8%PAGE上,可见到三种类型:①原始带消失,出现两条新带,长度为395bp和85bp,为含酶切位点...
...进一步证实。2.Southern印迹杂交Southern印迹杂交是经典的基因分析技术,已被广泛地用于基因突变,扩增、重排和丢失等许多方面的研究。石蜡包埋组织的Southern印迹杂交分析有以下几个方面值得注意:(1)当所分析的酶切片段长为...
...器官移杆的供、受者之间组织兼容性程度越高,器官存活的机率就越大。因此,在器官移植前,慎重选择供者是至关重要的。一般供者的ABO血型必需与受者一致,这是比较容易做的。此外,供者的HLA组织型别也应尽可能与受者相近。在HLA各座中,DR座最为...
...ApoB基因多态性研究较多的有RFLP、VNTR、SP多态性,分别叙述如下:1.RFLP的检测ApoB有10种RFLP,一般采用PCR-RPLPs方法进行分析,研究较多的有第26外显子XbaⅠ、MspⅠ位点,第29外显子EcoRⅠ位点,在...
...Cumming(1980)报告,不固定的组织切片ICC染色时,环鸟苷酸含量丢失80%以上。固定的目的是使构成组织细胞成分的蛋白等物质不溶于水和有机溶剂,并迅速使组织细胞中各种酶降解、失活,防止组织自溶和抗原弥散,保持组织细胞的完整性和所要检测...
...对ApoB基因多态性进行检测、分析的方法很多,如:限制性内切酶的酶谱分析法,PCR直接分析法,PCR产物RFLP分析法,等位基因特异性寡核苷酸(ASO)杂交法等等,其中最多用且简单的方法有PCR产物直接分析法和PCR产物RFLP分析法。...
...顺序不同所决定。这种碱基顺序的差别造成限制性内切酶识位置及酶切位点数目的不同,从而产生数量和长度不一的DNA酶切片段。用特异性探针对整个基因组DNA酶切片段进行杂交,即可分析限制性长度片段多态性(restriction fragment ...
...肾穿刺组织一般应切割为三小块,分别作冰冻切片、石蜡切片及超薄切片,进行荧光显微镜、光学显微镜及透射电镜观察。所应用的免疫细胞化学技术包括免疫荧光、免疫酶标及免疫电镜,兹分述如下:(一)免疫荧光细胞化学技术的应用自1938年超高压汞灯荧光...
...产量,嗣后,或采用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradientgel electrophoresis, DGGE)显示由基因编码胺基酸区DAN序列突变所致的单股DNA构象的多态性;或使用等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法(...
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