...我们判别流行菌株及其变异，顺藤摸瓜找出各菌株的流行特点和规律，寻找出始发病例和各地区各次流行间的内在联系。 指纹图的制作是先用蛋白水解酶将该菌裂解，用酚/氯法提取去氧核糖核酸，再用限制性内切酶亨特Ⅲ或伊考i消化去氧核糖核酸，通过聚丙烯酰胺...
...大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exonucleaseⅢ）是从带3’-OH末端的双链DNA，按3’→5’方向切除5’单核苷酸：大肠杆菌核酸外切酶Ⅶ则是从单链DNA的3’端和5’端切除寡核苷酸（两种形式）：（1）（2）前一种酶需要镁离子作辅助因子才有...
...重组质粒中目的基因的分离与纯化先取少量纯化的重组质粒，用限制性内切酶切出目的基因，经电泳分离，确认。以200μl含2mg DNA（重组质粒）为例：取10μl含100μg DNA，加90μl TE。按1μgDNA加2-5U限制性内切酶，1/10...
...细胞的限制-修饰系统中的修饰作用是由甲基化酶（methylase）来完成的。甲基化酶同限制性内切酶具有完全相同的识别顺序。甲基化酶使识别顺序中的某个碱基发生甲基化，保护DNA不被限制性内切酶切开。真核生物中目前只发现5-甲基胞嘧啶（M5C...
...如果目的序列两端有与载体上相同的限制性核酸内切酶位点，则同一限制酶切开产生的粘末端，在降低温度退火时，能重新互补结合，在DNA连接酶催化下，目的序列就与载体DNA链相连接（见图20-5）。图20-5 同一限制酶切割DNA粘性末端的连接不同...
...可催化特定的底物分解而呈现颜色，从而指示出含有目的的基因的细胞集落位置。免疫学方法特异性强、灵敏度高，适用于从大量转化细胞集合体中筛选很少几个含目的基因的细胞克隆。五、DNA限制性内切酶图谱分析这是在上述筛选后的进一步分析。目的序列插入载体...
...核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备：（1）直接分离基因核酸：即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。（2）化学合成基因核酸：即以单核苷酸为原料，以固相磷酸三酯法合成某一结构完全清楚，分子量较小的寡核苷核...
...基因工程又称遗传工程，是生物工程的主导技术。DNA重组技术或分子克隆是基因工程的核心。分子生物学研究中发现的许多核酸酶类都可用作基因工程的工具。其中能识别特定的回文序列并切割DNA双链的Ⅱ类限制性核酸内切酶在DNA重组技术中被广泛应用。...
...。经限制性内切酶消化后，乙醇固定组织DNA均显示由于重复DNA序列存在所产生的特征性卫星带，说明DNA被完成消化。Southern印迹杂交结果与冰冻组织一致。Sato 等（1990）用AMex方法处理组织，既可保存许多抗原成分，亦可使大...
...基因工程又称遗传工程，是生物工程的主导技术。DNA重组技术或分子克隆是基因工程的核心。分子生物学研究中发现的许多核酸酶类都可用作基因工程的工具。其中能识别特定的回文序列并切割DNA双链的Ⅱ类限制性核酸内切酶在DNA重组技术中被广泛应用。...
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