（1）用4%多聚甲醛（在0.05mol/l 磷酸缓冲液中，pH7.2）在原位固定（4 ℃ ）1h。 （2）用0.05mol/l PBS充分洗涤后，用HRP标记的抗体血清作用18h，再用PBS充分洗涤。 （3）2%戊二醛固定1h，再水洗。 （4）呈色反应，用DAB—H 2 O 2 呈色反应，水洗。 （5）1%锇酸后固定30min～1h，原位用环氧树脂包埋，光镜
可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。
荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后即刻引起发光，停止能量供给，发光也瞬时停止（一般持续10-7～10-8s）。可以产生明亮荧光的染料物质，称荧光色素。目前主要常用的荧光色素有以下3种：
1．染色特点 （1）要进行SC和IgA组织定位，必须有相应特异抗血清。SC抗血清国内没有生产。国内商品IgA抗血清的抗原多来自 人乳 中的SIgA，具有双重抗原性（SC和IgA），不能特异进行IgA组织定位，最好采用抗人α-重链抗血清。 （2）SC是糖蛋白，IgA是免疫球蛋白。在组织处理上虽然有人提出用冷冻切片或福尔马林固定胰酶消化的方法，我们的体会用冷酒精...
...接法免疫细胞化学技术可简化步骤，节 省时间，降低成本。为了清除组织间弥散的免疫球蛋白，我们在固定前用PBS浸洗，取得良好的效果。用双标记免疫荧光技术可以在同一张切片上显示出两种不同的抗体产生细胞。 1．组织加工根据研究目的的内窥镜直视下钳取胃、小肠或结肠粘膜。将取得的组织立即放入含4 ℃ ，pH7.2、0.01mol/l PBS烧杯内搅拌10～18h后直接放...
Kbaffan等（1986）首先创立了蓝色荧光素标记和染色技术，可进行双标记或多标记。 （1）取7-氨基-4-甲基香豆素（7-amino-4-methyl coumarin, AMC）260μg溶于二甲亚砜25μl中。 （2）将上液加入10ml IgG的 巴比妥缓冲液（0.5mol/L,pH8.5,内含50～100mg IgG）中，室温反应2h，过Sepha...
显微和超显微制片技术步骤之一。为了便于在 显微镜 下观察，利用各种 染色 剂化学性质的不同，使 组织切片 内部的不同结构分别着色。 细胞 染色 染色是生物显微玻片 标本 制作中最重要的环节之一。通过染色，将生物组织浸入染色剂内，使组织细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色，产生不同的 折射率 ，以便观察。 最常用的是 苏木精 和 伊红 染色法...
...，在室温下能保存2年以上，在低温中可保存多年。易溶于水和酒精。最大吸收光谱为490～495nm，最大发射光谱为520～530nm，呈现黄绿色荧光，分子量为398.4（图3-5）。 在碱性条件下，FITC的异硫氰酸基在水溶液中与免疫球蛋白的自由氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键，成为标记荧光免疫球蛋白，即荧光抗体。反应式如下（图3-6）： 一个Ig分子上最多能 标...
以荧光物标记 抗体 进行 抗原 定位的技术。 荧光抗体技术 在临床检验上已用作 细菌 、 病毒 和 寄生虫 的检验及 自身免疫病 的诊断等。在细菌学检验中主要用于菌种的鉴定。 标本 材料可以是 培养物 、 感染 组织、病人分泌 排泄物 等。本法较其他鉴定细菌的 血清学 方法速度快、操作简单、敏感性高，但在细菌实验诊断中，一般只能作为一种补充手段使用，而不能代...
荧光素酶 （英文名称：Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，其中最有代表性的是一种 学名 为Photinus pyrali'的萤火虫体内的荧光素酶。在相应化学反应中，荧光的产生是来自于萤光素的氧化，有些情况下反应体系中也包括 三磷酸腺苷 （ATP）。没有荧光素酶的情况下，萤光素与氧气反应的速率非常慢，而钙离子的存在常常可以进一步加速反应...
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