...P标记的互补核苷酸补入缺口，DNA聚合酶Ⅰ的这两种活性的交替作用，使缺口不断向3’的方向移动，同时DNA链上的核苷酸不断为32P标记的核苷酸所取代。图13-1 缺口平移标记法粗线示标记部分探针的标记也可以采用随机引物法，即向变性的探针溶液...
...酶活性。第三，DNA探针的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如缺口平移法、随机引物法、PCR标记法等，能用于同位素和非同位素标记。（二）cDNA探针cDNA是指互补于mRNA的DNA分子（complementary DNA）。cDNA是由...
...，也不能用单链DNA作为模板。2．噬菌体DNA聚合酶这里以T4DNA聚合酶为例。它也具有5’→3聚合酶活性，但它的外切酶活性比大肠杆菌的要高200倍。因此，它也可用来补齐单链末端或标记同位素。...
...显色灵敏度好，紫外照射形成二聚体而标记BrdU酶标抗BrdU抗体，显色灵敏度好，细菌内含质粒复制掺入铕-补骨脂素荧光灵敏度一般缺口平移标记法先由DNase Ⅰ在DNA双链上切出随机切口，DNA聚合酶Ⅰ沿缺口水解5′端核苷酸和3′端修复加入被...
...因而易用T4噬菌体多核苷酸激酶进行磷酸化反应，而将α-32P从[γ-32P]ATP转移至其5’端。这种磷酸化反应最多能使每一寡核苷酸分子中掺入一个32P原子。2）用大肠杆菌DNA聚合酶i Klenow片段标记合成的寡核苷酸探针，其比活性更高，...
...早在1956年Kornberg等就从大肠杆菌提取液中发现了DNA聚合酶，并且得到了DNA聚合酶Ⅰ纯品。DNA聚合酶Ⅰ是由分子量为109000的一条多肽链构成，此酶可被枯草杆菌蛋白酶分解为两个片段，一个片段分子量为76000，有聚合酶活性，...
...因而易用T4噬菌体多核苷酸激酶进行磷酸化反应，而将α-32P从[γ-32P]ATP转移至其5’端。这种磷酸化反应最多能使每一寡核苷酸分子中掺入一个32P原子。2）用大肠杆菌DNA聚合酶i Klenow片段标记合成的寡核苷酸探针，其比活性更高，...
...包含基因组的全信息的克隆库。然后用多种其它菌种的DNA作探针来筛选，产生杂交信号的克隆被剔除，最后剩下的不与任何其它细菌杂交的克隆则可能含有该细菌特异性DNA片段。将此重组质粒标记后作探针进一步鉴定，亦可经DNA序列分析鉴定其基因来源和功能。...
...（一）cRNA探针的同位素标记1．标记液（转录标记）2．转录缓冲液※：用地高辛或生物素标记时，用UTP替代。3．标记终止液4．标记探针水解液先用dH2O悬浮探针，再加入后两种试剂，轻轻振摇混合，于60℃条件下反应。5．探针水解时间注：LO...
...32P]dCTp 1.5×106Bq，dATp 、dGTP和dTTP各200μmol/L。标记反应包括3个步骤：（1）变性：反应管在95℃水浴5min，然后离心；（2）退火：37℃水浴2min；（3）延伸：加入DNA聚合酶i 1u，37℃水浴...
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