...核酸序列,已广泛应用于临床检验和科学研究。Leary等(1983)用缺口平移法标记的生物素DNA探针成功地用于Southern印迹杂交技术。Forst等(1985)发表了光敏生物素直接标记核酸的简便方法,使核酸和蛋白质的生物素标记探针技术前进...
...连接在DNA上以后,再进行AP酶显色。这里SA为Streptavidin(链酶亲合素),BAP为生物素化的磷酸酶,B为生物素(biotin),ABC为Avidin – Biotin - Enzyme com-plex, 即亲合素- 生物素-...
...(一)光敏生物素标记cRNA探针的应用以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针,使其最终浓度为0.5~1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素(1μg/μl)混合。在150瓦卤素灯下,距离光源20...
...光敏DNP由一连接臂组成,一端是2,4-二硝基苯,另一端有芳基叠氮化合物。此法适用于含氨基检测基团。其敏感性和光敏生物素标记探针相同,检测时需要抗DNP抗体和免疫化学显色。标记方法:(1)DNA不心变性,必须溶于水中,取2~10μg10μ...
...每一寡核苷酸分子可带有若干个放射性原子,放射性比活度可高达2×1010计数/(min·mg)。附图 DNA聚合酶i Klenow片段标记合成寡核苷酸探针寡核苷酸探针的非放射性标记时,可用以下几种方法:1.酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端...
...基化DAN探针标记简便,不需作缺口平移标记,敏感度也较高。但自生物素和高辛标记探针技术建立后,已有取而代之的趋势。生物素标记探针技术是Brigat(1983)首先建立的,它利用生物素标记的探针在组织切片上检测了病毒DNA,通过生物素与抗...
...每一寡核苷酸分子可带有若干个放射性原子,放射性比活度可高达2×1010计数/(min·mg)。附图 DNA聚合酶i Klenow片段标记合成寡核苷酸探针寡核苷酸探针的非放射性标记时,可用以下几种方法:1.酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端...
...,各1min,各1min。空气干燥。2.探针标记和纯化用缺口平移法将生物素11-dUTP标记在DNA核酸探针上。3.变性与杂交加20~100ng生物素标记探针到杂交液中,加入5μl 20mg/ml人或鲱鱼精子DNA,总容量为30~40μl,...
...酶活性。第三,DNA探针的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移法、随机引物法、PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。(二)cDNA探针cDNA是指互补于mRNA的DNA分子(complementary DNA)。cDNA是由...
...标记探针DNA。近年来,非同位素标记方法发展很快,已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记DNA探针法,是较为成功的一种非同位素标记方法。其原理是:用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连接在dUTP上(Dig-dUTP)。用随机引物及...
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