...利用特定抗体与目的基因表达产物特异性结合的作用进行筛选。此法不是直接筛选目的基因,而是通过与基因表达产物的反应指示含有目的基因的转化细胞,因而要求实验设计要使目的基因进入受体细胞后能够表达出其编码产物。抗体可用特定的酶常用过氧化物酶、碱性...
...目前对于基因序列的突变分析国内外多采用直接测序方法,直观又准确。例如,1996年Sakai等报道了对高α脂蛋白血症患者CETP基因内含子10和内含子14片段序列的突变分析。其方法为:采取患者全血根据Kunkel等方法准备基因DNA;...
...关连抗原(VWF),用免疫法测定为阳性反应。此外,在硬化血管取材时,巨噬细胞转化的泡沫细胞可能混入,除形态学的差异外,泡沫细胞含有丰富的氧化修饰的LDL,氧化LDL与相应抗体反应后在荧光显微镜下极易区别。二、平滑肌细胞的鉴定如前所述,平滑肌...
...散弹射击法,意味着从含有众多的基因序列克隆群中去获取目的基因或序列。当生物基因组比较小时,此法较易成功;当生物基因组很大时,构建其完整的基因组文库就非易事,从庞大的文库中去克隆目的基因工程量也很大。图20-8 基因组DNA文库的构建...
...此PCR产物连接到细菌质粒上,再进一步纯化后测序,以便鉴定脂蛋白酯酶的突变序列。下面简要介绍DNA克隆和测序的常用方法。...
...关连抗原(VWF),用免疫法测定为阳性反应。此外,在硬化血管取材时,巨噬细胞转化的泡沫细胞可能混入,除形态学的差异外,泡沫细胞含有丰富的氧化修饰的LDL,氧化LDL与相应抗体反应后在荧光显微镜下极易区别。二、平滑肌细胞的鉴定如前所述,平滑肌...
...McAb的Ig类与亚类的鉴定一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时已经基本上确定了抗体的Ig类型。如果用的是酶标或荧光素标记的兔抗鼠IgG或IgM,则检测出来的抗体一般是IgG类或IgM类。至于亚类则需要用标准抗亚类血清系统作双扩或夹心...
...所得到的目的序列或基因的克隆,都要用其核酸序列测定来最后鉴定。已知序列的核酸克隆要经序列测定确证所获得的克隆准确无误;未知序列的核酸克隆要测定序列才能确知其结构、推测其功能,用进一步的研究。因此核酸序列测定是分子克隆中必不可少的鉴定步骤。...
...此PCR产物连接到细菌质粒上,再进一步纯化后测序,以便鉴定脂蛋白酯酶的突变序列。下面简要介绍DNA克隆和测序的常用方法。...
...从mRNA到双链DNA的逆转录过程。所得到的双链cDNA分子经S1核酸酶切平两端后接一个有限制酶切点的接头(Adapter),再经特定限制酶消化产生粘性末端,即可与含互补末端的载体进行连接。常用的克隆载体是λ噬菌体DNA,如λgt、EMBL...
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