...RNA探针比cDNA探针的敏感性提高10倍以上,在许多优点。它们是单链,不需变性,也没有互补链的干扰,与靶基因杂交比DNA探针更稳定。Bio-11-dUTP可通过Sp6、T3和T7RNA聚合酶掺入到RNA转录子中。标记方法:其下列反应体积...
...质量控制方面比生物素标记技术要优越,可以检测出人基因组DNA中的单拷贝基因。地高辛标记法显示的颜色为紫蓝色(标记碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶显色系统),有较好的反差背景。核酸探针根据标记方法的不同可粗略分为放射性探针和非放射性探针两类。根据探针...
...(一)光敏生物素标记cRNA探针的应用以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针,使其最终浓度为0.5~1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素(1μg/μl)混合。在150瓦卤素灯下,距离光源20...
...-N-羟基琥珀标记化学修饰的DNA法 五、缺口平移法标记生物素DNA探针(二步法) 六、生物素随机引物标记探针方法 七、异羟基洋地黄毒甙(Digoxigenin)标记核酸探针 八、光敏2,4-二硝基苯(光敏DNP)标记DNA法 九、三硝基苯...
...一、生物素标记核酸探针方法 二、光敏生物素标记核酸探针 三、生物素-补骨脂素(Biotin -psoralen)标记法 四、生物素-α-氨基乙酸-N-羟基琥珀标记化学修饰的DNA法 五、缺口平移法标记生物素DNA探针(二步法) 六、生物素...
...4.荧光标记DNA探针在细胞核混悬液杂交中的应用(1)细胞核的分离:将培养的细胞制成细胞混悬液,或以胰蛋白酶消化法于培养盖上收集培养细胞。应用MgSO4染色分离方法分离细胞核(Van den Engh etal 1986, 在Traok和...
...标记的新生核酸链。此法也适用于探针的非放射性标记。如32P标记DNA探针(缺口平移法):反应体积为25μl,内含0.3μgDNA片段,4μl 0.2μmol/L dNTP, 1.1×106Bq [α-32P]dATP,1μl2万倍稀释的...
...要合成一对特异性PCR引物。使用从探针DNA上制备的小片段作引物也能取得较好的标记效果。(二)核酸探针的非放射性标记技术1.光敏生物素标记核酸 目前使用的光标生物素试剂有两种:光生物素(乙酸盐)和补骨脂素生物素。它们都是由一个光敏基团、一个...
...标记技术有:缺口平移;DNA快速末端标记;用T4多核苷酸酶标记DNa5'末端,随引物延伸;聚合酶链反应。核酸探针的非放射性标记技术有:光促生物素标记核酸、酶促生物素标记核酸、寡核苷酸的生物素末端标记、酶标DNA、酶标寡核苷酸、DNA半抗原标记。...
...清楚。。 患儿体内异常累积的琥珀酰丙酮还具有强力抑制δ-氨基-γ酮戊酸脱水酶(δ-ALA dehydrase)活性的作用,影响到卟啉的合成代谢,可使患儿尿中大量排出δ-氨基-γ酮戊酸(δ-ALA)并出现间隙性卟啉病的临床症状。这类患儿肝细胞和...
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