...（一）cRNA探针的同位素标记1．标记液（转录标记）2．转录缓冲液※：用地高辛或生物素标记时，用UTP替代。3．标记终止液4．标记探针水解液先用dH2O悬浮探针，再加入后两种试剂，轻轻振摇混合，于60℃条件下反应。5．探针水解时间注：LO...
...预处理、预杂交、杂交和杂交后冲洗的方法同概述中基本方法一节 。光敏生物素核酸探针原位杂交组化程序：（1）石蜡切片脱蜡入水后，置0.1mol/l PBS pH7.2冲洗5min；冰冻切片直接入PBS冲洗5min。（2）0.1mol/l 甘氨酸...
...靠得近时，才能产生受激发光，因此这种方法具有较好的特异性。（2）吖啶翁酯标记法：吖啶翁酯标记探针与靶核酸杂交后，未杂交的标记探针分子上的吖啶翁酯可以用专门的方法选择性除去，所以杂交探针的化学发光是与靶核酸的量成比例的。该法的缺点是检测的敏感度...
...加DNA聚合酶（SABC）8u，混匀，37℃，2h，加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl，终止反应。在随机引物标记体系中，加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%)，发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。...
...模板转录生成RNA。这种体外转录反应效率很高，在1小时内可合成近10μg的RNA产物。只要在底物中加入适量的放射性或生物素标记的dUTP，则所合成的RNA可得高效标记。该方法能有效地控制探针的长度并可提高标记分子的利用率。RNA探针和...
...需要的37℃，因此，建议对盖片应用前在37℃进行预热。（3）用免疫细胞化学或组织化学方法显示荧光标记。自80年代以来，荧光素标记检测系统日益增加。包括：①生物素标记探针与荧光素标记的抗生物素（avidin）或抗生物素抗体。②氨乙酰基荧光（...
...（一）基本原理在地高辛标记核酸探针广泛用于光镜水平的原位杂交试验并获极为满意的结果后，科学工作者试图将其应用于电镜水平。其基本原理和生物素标记核酸探针-PA-Gold电镜杂交技术的基本原理相似，首先利用地高辛修饰核酸探针，与细胞或组织进行...
...一、生物素标记核酸探针方法 二、光敏生物素标记核酸探针 三、生物素-补骨脂素（Biotin -psoralen）标记法 四、生物素-α-氨基乙酸-N-羟基琥珀标记化学修饰的DNA法 五、缺口平移法标记生物素DNA探针（二步法） 六、生物素...
...个部分组成：光敏基团、连结臂和生物素（图20-1）。在强光下，不需酶反应，光敏生物素的光敏基团即可与核酸中的碱基相结合。光敏生物素标记核酸，方法简单，灵敏度也不低，但标记效率不高，每100～150个碱基才能标记一个生物素，对于短的基因探针...
...将会降低杂交温度所需要的37℃，因此，建议对盖片应用前在37℃进行预热。（3）用免疫细胞化学或组织化学方法显示荧光标记。自80年代以来，荧光素标记检测系统日益增加。包括：①生物素标记探针与荧光素标记的抗生物素（avidin）或抗生物素抗体。...
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