...碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法是放射性同位素标记。常用的放射性同位素有32P和35S前者能量高，信号强，最常用。放射性同位素标记探针虽然敏...
RNA探针是一类很有前途的核酸探针，由于RNA是单链分子，所以它与靶序列的杂交反应效率极高。早期采用的RNA探针是细胞mRNA探针和病毒RNA探针，这些RNA是在细胞基因转录或病毒复制过程中得到标记的，标记效率往往不高，且受到多种因素的制约。这类RNA探针主要用于研究目的，而不是用于检测。例如，在筛选逆转录病毒 人类 免疫缺陷 病毒（HIV）的基因组DNA克...
1．缺口平移 该技术由Kelly等于1970年创立。其原理是首先用DNA酶在双链DNA探针分子的一条链上制造一些缺口（nick ）,缺口处会形成3’—羟基末端，这时再在大肠杆菌DNA聚合酶I的催化下将核苷酸残基加在3’－羟基上，同时，根据大肠杆菌酶DNA聚合酶I的5’→3’核酸外切酶活性，此酶将缺口5’侧核苷酸依次切除。其结果是在缺口平移（nick tr－a...
执行生命功能、表现生命特征的主要物质是蛋白质分子。DNA贮存着决定生物特征的遗传信息，只有通过蛋白质才能表达出它的生命意义，直接决定蛋白质合成及蛋白质特征的不是RNA而是DNA，因而人们确定DNA是遗传信息贮存者后就推测DNA是通过RNA去决定蛋白质合成的。50年代末RNA聚合酶的发现开始证实了这一推测。 以DNA为模板合成RNA的过程称为转录（transc...
以 DNA 为模板合成 RNA 是生物界RNA合成的主要方式，但有些 生物 像某些 病毒 ， 噬菌体 它们的 遗传信息 贮存在RNA 分子 中，当它们进入宿 细胞 后，靠复制而 传代 ，它们在RNA指导的RNA 聚合酶 催化 下合成RNA分子，当以RNA模板时，在RNA 复制酶 作用下，按5'→3'方向合成互补的RNA分子,但RNA复制酶中缺乏校正功能,因此...
执行生命功能、表现生命特征的主要物质是 蛋白质 分子 。 DNA 贮存着决定 生物 特征的 遗传信息 ，只有通过蛋白质才能表达出它的生命意义，直接决定 蛋白质合成 及蛋白质特征的不是 RNA 而是DNA，因而人们确定DNA是遗传信息贮存者后就推测DNA是通过RNA去决定蛋白质合成的。50年代末RNA 聚合酶 的发现开始证实了这一推测。 以DNA为模板合成RN...
执行生命功能、表现生命特征的主要物质是蛋白质分子。DNA贮存着决定生物特征的遗传信息，只有通过蛋白质才能表达出它的生命意义，直接决定蛋白质合成及蛋白质特征的不是RNA而是DNA，因而人们确定DNA是遗传信息贮存者后就推测DNA是通过RNA去决定蛋白质合成的。50年代末RNA聚合酶的发现开始证实了这一推测。 以DNA为模板合成RNA的过程称为转录（transc...
转录 是以 DNA 为模板合成 RNA 的过程,经过转录DNA 分子 中的贮存信息传递到RNA分子中,再由mRNA做为模板合成 蛋白质 分子,转录也是从DNA的一个特定位置开始的,以DNA分子中的一条链为模板,在RNA 聚合酶 作用下,以四种 单核苷酸 为原料,合成方向仍是5'→3',完成RNA的合成. 大肠杆菌 的RNA聚合酶由五个 亚基 构成,α2ββ'...
（一）基本原理 在地高辛标记核酸探针广泛用于光镜水平的原位杂交试验并获极为满意的结果后，科学工作者试图将其应用于电镜水平。其基本原理和生物素标记核酸探针-PA-Gold电镜杂交技术的基本原理相似，首先利用地高辛修饰核酸探针，与细胞或组织进行杂交，再用抗地高辛抗血清相连胶体金与之结合，进行细胞或组织特异核苷酸的超威结构定位。为增强金的显示效应，可用银加强法增强...
探针 制备就是目的 基因 的标记， 核酸 标记方法常用的有缺口平移法、随机 引物 法、 末端标记 法等。 标记物 质有 放射性 元素（如 32 P等）和非 放射性物质 （如 生物素 、 地高辛 等）。 32 P是最常用的 核苷酸 标记 同位素 ，被标记的dNTP本身就带有 磷酸基 团，便于标记，特点是比活性高，可达9000Ci/mmol；发射的β 射线 能量...
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