...质粒的外源DNA可大于40kb。重组的柯斯质粒可象噬菌体λ一样感染大肠杆菌，并在细菌细胞中复制。如把宿主菌在含氯霉素的培养基中生长，柯斯质粒可以扩增到宿主细胞DNA总量的50%左右。采用柯斯质粒作载体的困难是：①载体自身只相当于可以插入片段...
...的活性就急剧下降。因此要求λ载体DNA和外源DNA长度之和在39～53kb之间。置换型载体DNA用选定的限制酶完全酶切后，要设法除去中间片段，只留下左臂和右臂以便用外源DNA片段连接，包装成重组噬噬体。这是因为左臂和右臂与中间片段间都有单链...
...通过限制性内切酶切割成互相能连接的末端与载体基因连接成重组基因）转化细菌（宿主），可以转入受体菌，通过筛选而获得克隆。质粒因具有耐药性标准，作为载体进行筛选大为方便。噬菌体则可利用其溶解细菌后在固体平板培养基中形成的噬菌斑予以克隆化。通过...
...通过限制性内切酶切割成互相能连接的末端与载体基因连接成重组基因）转化细菌（宿主），可以转入受体菌，通过筛选而获得克隆。质粒因具有耐药性标准，作为载体进行筛选大为方便。噬菌体则可利用其溶解细菌后在固体平板培养基中形成的噬菌斑予以克隆化。通过...
...中国医学科学院医药生物技术研究所的研究人员以原核细胞表达的基因重组细胞因子可溶性受体为靶位，目前已成功构建了4种新模型，对微生物等天然产物、合成化合物和中药进行了大量筛选，获得了依博素（139A）等7种具有拮抗活性的新型化合物。特别是...
...目的基因序列与载体连接后，要导入细胞中才能繁殖扩增，再经过筛选，才能获得重组DNA分子克隆，不同的载体在不同的宿主细胞中繁殖，导入细胞的方法也不相同。...
...目的基因序列与载体连接后，要导入细胞中才能繁殖扩增，再经过筛选，才能获得重组DNA分子克隆，不同的载体在不同的宿主细胞中繁殖，导入细胞的方法也不相同。一、转化由于外源DNA的进入而使细胞遗传性改变称为转化，早在1943年，Avery等就...
...重组酶介导、单个细胞内轻重连接获取体内原始配对信息，以及经振荡筛选等系列技术处理后，成功地构建出一库容量为3×106的白癜风噬菌体抗体库。 该抗体库经抗体表达、特异性检测及吸附筛选等检验，结果显示：细胞内PCR扩增ScFv基因，目的条带为...
...这是最容易连接的片段，如图24-1所示。将已经连接外源DNA的细菌质粒载体转化感受态的大肠杆菌，然后在含有AP等抗生素的平板上鉴定阳性重组体菌落，具体方法有：①检查α互补能力的丧失情况；②对小量制备的质粒DNA进行限制酶切的分析；③核酸杂交...
...基因表达的组织特异性。进行基因剔除转基因动物研究时，首先要设计与待剔除基因的同源性的载体基因，包括正负选择标志基因，通过同源重组（同源取代或同源插入）而使目的基因失活，从而建立缺基因动物。在进行基因设计时，还应考虑转基因动物的遗传背景和设计相应的...
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